人体GADD45α蛋白的纯化及其在人血小板及人心肌组织表达的研究

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生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45a(growth arrest and DNA damage-inducible protein GADD45alpha, GADD45α)是DNA损伤诱导基因编码的分子量为18.3kDa的酸性核蛋白,又称为DDIT1、GADD45, GADD45a可与多种生物大分子相互作用在DNA损伤修复、细胞周期阻滞、细胞增殖、凋亡等细胞应答反应中发挥重要的调控作用。GADD45a与动脉粥样硬化、心肌梗死、先天性心脏病等多种心血管疾病的发生及发展有关。研究GADD45a蛋白的结构与功能,对阐明多种疾病的发病机制以及研发新型高效的治疗策略有积极的意义。本课题由两部分组成。1.GADD45a蛋白质的克隆表达,纯化研究:采用PCR从人肝细胞cDNA文库获得GADD45a基因的全长编码序列。经BamH I及XhoI酶切位点连接到带GST标签的pGEX-6P-1载体,阳性克隆转染E. coli BL21(DE3)。经IPTG诱导,蛋白质以部分可溶形式表达,经过亲和层析、分子筛、离子交换层析等方法探索蛋白质纯化方法。2.通过RT-PCR实验方法,检钡GADD45a在人血小板及人心肌组织中的表达情况。本论文的创新性体现在:1)成功构建了人体GADD45a在大肠杆菌中的表达载体,初步探索了该蛋白质的纯化方法。2)在mRNA水平证实了GADD45a在人血小板及人心肌组织中的表达。
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