Let-7b和PPS、PSeD影响视网膜干细胞增殖分化的研究

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目的:  本论文将探讨微小RNA let-7b以及多聚物材料PPS(Poly(1,3-propylene sebacate))和PSeD(poly(sebacoyl diglyceride))对视网膜干细胞(RPC)增殖分化的影响,有望为退行性视网膜疾病的治疗提供新的思路。  方法:  1.在增殖或分化情况下转染let-7b mimics/inhibitor,TLX质粒或siTLX,在不同时间点收集细胞。定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白免疫印迹或免疫细胞化学评估视网膜增殖和分化相关的基因和蛋白表达水平。  2.检测PPS、PSeD的杨氏模量,亲水角。倒置显微镜下记录细胞生长形态。qPCR以及细胞毒性试验分析两种材料的细胞相容性。qPCR、免疫细胞化学和蛋白质免疫印迹检测RPC增殖分化相关基因和蛋白的表达。细胞划痕实验分析视网膜干细胞在PPS、PSeD和PLGA上的迁移能力。  结果:  1.Let-7b和TLX在体外RPC的命运决定中扮演重要角色。let-7b在RPC中的过表达可下调TLX的表达水平,导致RPC增殖能力的减弱,向神经元分化的能力增强。反之,let-7b的低表达会引起TLX的表达增强,导致RPC增殖能力的增强,分化减弱。let-7b通过抑制TLX的表达负向调控RPC的增殖,加速RPC向视网膜神经元的分化。  2.PPS和PSeD具有较好的细胞相容性。PPS可显著促进视网膜干细胞的增殖。生长在PSeD上的RPC倾向于向β3-tubulin和rhodopsin阳性的视网膜神经元分化,因此PSeD可明显加强PRC向视网膜神经元的分化。  结论:  1.在RPC命运决定中,let-7b和TLX通过一种负向反馈调控方式调节RPC的增殖和分化,从新的视角初步阐明了RPC体外增殖和分化的调控机制。  2.PPS有明显的促RPC增殖能力,PSeD则有显著促RPC向视网膜神经元分化能力,提示PPS、PSeD在未来的视网膜细胞替代治疗中有潜在的应用价值。
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