目的:缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）参与精索静脉曲张（varicocele,VC）大鼠生精功能的调节,VEGF/PI3K/Akt通路在其中起重要作用。本研究应用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建慢病毒载体以降低HIF-1α基因在精索静脉曲张大鼠睾丸组织中的表达,探讨HIF-1α通过VEGF/PI3K/Akt途径对VC大鼠生精细胞凋亡的影响。方法:1.建立实验分组模型24只雄性性成熟SD大鼠随机均分为4组,分别标记N、V、H、L,N组为正常组,对V组、H组、L组三组SD大叔进行左肾静脉部分结扎构建VC模型。H组和L组SD大鼠继续培养8周,构建慢病毒载体,用HIF-1α慢病毒感染H组,Luc慢病毒感染L组,继续培养8周。2.观察并拍摄各组大鼠睾丸组织形态麻醉处死大鼠后,摘取睾丸组织及时置于Bouin’s液中,然后经脱水、包埋,切片、脱蜡、HE染色、脱水、透明等一系列处理后。显微镜观察并拍摄睾丸组织的形态学图像。3.观察并拍摄各分组睾丸组织生精细胞凋亡情况大鼠睾丸石蜡切片经过常规脱蜡水化,应用TUNEL荧光法检测生精小管中的凋亡细胞数目。4.检测VEGF/PI3K/Akt通路相关分子蛋白表达的变化采用Western blot、免疫荧光或免疫组化技术检测大鼠睾丸组织中VEGF、Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K蛋白水平的表达情况。5.统计学分析通过Graphpad prisim8.0及Image J对图像分析后,所有数据采用SPSS 21.0进行统计学分析,分析数据以平均值±标准差（（?））形式表示,各分组差异采用单因素方差对比,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.成功制备VC模型,根据精索静脉曲张模型标准,实验组左侧精索静脉直径扩张到1.0～1.5 mm,为成功的精索静脉曲张模型。2.与N组相比,V组生精上皮细胞密度明显降低且生精细胞排列紊乱;HIF-1α表达降低的H组相比V组和L组生精小管结构及生精细胞密度和排列明显改善。3.TUNEL染色观察生精上皮细胞凋亡情况,V组生精细胞凋亡数量较N组明显增加（p<0.05）。然而,与L组相比,H组细胞凋亡数量明显减少（p<0.05）。4.V组中VEGF/PI3K/Akt信号通路相关分子VEGF、p-Akt和p-p70S6K蛋白表达水平较N组和H组明显升高（p<0.05）,H组与N组无明显差异。结论:睾丸组织缺氧时,缺氧诱导因子HIF-1α相应出现的表达增多,继而诱导VEGF表达升高,从而激活PI3K/Akt信号通路,磷酸化Akt激活雷帕霉素（m TOR）的靶点,活化的m TOR通过改变翻译调节因子4E-BP1和p70S6K的磷酸化状态,从而导致HIF-Iα合成增加。HIF-Iα表达的增加可继续诱导VEGF表达升高,VEGF高表达可抑制精原细胞增殖,导致生精功能障碍。当VC睾丸组织HIF-1α基因沉默后,VEGF表达降低,PI3K/Akt信号通路相关蛋白Akt、p70S6K表达降低,HIF-Iα表达降低,VEGF对精原细胞的抑制作用减弱,生精功能得到改善。VC导致男性不育可能是由于睾丸缺氧导致HIF-1α升高,从而激活下游VEGF/PI3K/Akt信号通路所致。