【摘 要】
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目的:本研究通过对化疗耐药的胃癌组织和胃癌细胞系检测发现miR-21的高表达,从而探究miR-21与胃癌化疗耐药的相关性,以及其中的作用机制,从而为未来胃癌患者临床化疗方案的开
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目的:本研究通过对化疗耐药的胃癌组织和胃癌细胞系检测发现miR-21的高表达,从而探究miR-21与胃癌化疗耐药的相关性,以及其中的作用机制,从而为未来胃癌患者临床化疗方案的开发提供相关的理论支持。材料与方法:本研究临床标本来自泰山医学院附属医院18个胃癌患者的捐赠,每例标本都同时有癌组织和胃正常黏膜组织,本研究使用的胃癌化疗耐药细胞系和其他细胞系均来自本实验室的细胞库。采用qRT-PCR的方法检测这些组织和细胞中的miR-21和Bak的mRNA表达情况,采用MTT方法检测细胞的活性,Western Blot方法检测Bak的蛋白表达情况。研究通过双荧光素酶报告基因载体pMIR-REPORT构建Bak3’-UTR-wt和Bak 3’-UTR-mut载体,并使用lip2000转染试剂、双荧光试剂盒和构建好的载体验证miR-21和Bak的特异性结合。最后通过裸鼠成瘤实验验证miR-21在体内的化学耐药功能。结果:1.MiR-21在胃癌组织和化疗耐药的胃癌细胞系中高表达2.MiR-21下调促凋亡蛋白Bak的表达3.敲除或者过表达miR-21可以使胃癌细胞系对DDP敏感或者耐受4.体内实验验证miR-21通过下调Bak的表达水平增加胃癌组织的化疗耐药结论:MiR-21通过靶向Bak调控胃癌的化疗耐药
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