草酸钙结晶与肾小管上皮细胞互作对巨噬细胞调控的研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hyq20061001
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目的:研究草酸钙晶体与小鼠肾小管上皮细胞相互作用后对单核/巨噬细胞趋化因子表达的影响。方法:小鼠肾小管上皮细胞加入CaCl2溶液和草酸钠溶液制备的100μg/ml草酸钙晶体,24小时后收集上清液和细胞。采用实时荧光定量PCR技术检测单核/巨噬细胞相关趋化因子 ENO1,CCL2,CCL5,CCL7,GM-CSF,M-CSF,IL-4表达的水平。结果:RT-PCR结果发现草酸钙晶体刺激肾小管上皮细胞后,单核/巨噬细胞趋化因子ENO1,CCL2,CCL5表达增强,GM-CSF表达量大幅上升,差异有统计学意义(P<0.05)。CCL7,IL-4表达量下调,差异有统计学意义(P<0.05),M-CSF表达量下调,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:草酸钙晶体和小鼠肾小管上皮细胞共培养后,能够刺激单核/巨噬细胞的一些相关趋化因子表达增强或下调。目的:研究草酸钙晶体与小鼠肾小管上皮细胞互作对巨噬细胞迁移和极化的影响。方法:1、Transwell共培养研究草酸钙晶体与小鼠肾小管上皮细胞互作对巨噬细胞迁移影响。Transwell上室加入不同分化状态的巨噬细胞(BMM,M1,M2细胞),下室肾小管上皮和草酸钙结晶互作系统,共培养24h,48h。2、用草酸钙晶体与肾小管上皮细胞互作条件培养基处理不同极化状态的巨噬细胞(BMM,M1,M2细胞),荧光定量PCR和免疫荧光检测巨噬细胞极化。结果:1.M1细胞和肾小管上皮细胞孵育时迁移能力最强,M2细胞和草酸钙、肾小管上皮细胞互作后共同孵育时迁移能力最弱。加入草酸钙晶体的肾小管上皮细胞能抑制不同表型的巨噬细胞细胞的迁移。2.M1巨噬细胞高表达iNOS,mincle,低表达arg-1,mrc1,差异有统计学意义(P<0.05),M2巨噬细胞高表达arg-1,mrc1,低表达iNOS,mincle。草酸钙晶体和肾小管上皮细胞互作后,对巨噬细胞arg-1表达稍有增加,但不明显。结论:草酸钙晶体与小鼠肾小管上皮细胞互作对不同极化的巨噬细胞细胞迁移均有抑制作用,M1细胞的迁移能力最强,M2细胞的迁移能力最弱,可能会促进巨噬细胞向M2方向极化。目的:研究草酸钙晶体对小鼠肾小管上皮细胞分泌趋化因子的调控作用通路以及对巨噬细胞的迁移和极化的影响。方法:1.使用TLR4抑制剂TAK242处理小鼠肾小管上皮细胞,24小时后收集上清液和细胞。采用实时荧光定量PCR技术检测单核/巨噬细胞相关趋化因子CCL2,CCL5表达的水平。2.Western blot检测草酸钙结晶处理小鼠肾小管上皮TLR4/p38 MAPK通路激活情况。3.TLR4抑制剂作用下,用transwell共培养和免疫荧光检测草酸钙结晶和小鼠肾小管上皮细胞互作对巨噬细胞迁移和极化。结果:1.草酸钙结晶与小鼠肾小管上皮细胞互作,诱导CCL2和CCL5表达,TLR4抑制剂TAK242抑制CCL2和CCL5的表达。2.草酸钙结晶激活肾小管上皮细胞p38 MAPK信号通路,TLR4抑制剂TAK242能够抑制草酸钙结晶对肾小管上皮细胞中p38的激活作用。3.抑制草酸钙晶体处理的肾小管上皮细胞TLR4,能够抑制M2巨噬细胞迁移,对BMM和M1型巨噬细胞迁移无明显影响。4.TAK242能够促进M2巨噬细胞发生极化。结论:提示草酸钙结晶可能通过TLR4/p38 MAPK通路刺激小鼠肾小管上皮细胞表达趋化因子CCL2和CCL5,并且影响M2型巨噬细胞向草酸钙-肾小管上皮细胞的迁移。
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