【摘 要】
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目的 分析并鉴定草酸和一水草酸钙(COM)结晶损伤人肾小管上皮细胞(HK-2)后细胞蛋白质谱的表达变化,探讨肾小管上皮细胞受损在肾结石形成中的可能作用.方法 体外培养正常HK-2
【机 构】
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南京军区福州总医院泌尿外科,第二军医大学长海医院泌尿外科
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目的 分析并鉴定草酸和一水草酸钙(COM)结晶损伤人肾小管上皮细胞(HK-2)后细胞蛋白质谱的表达变化,探讨肾小管上皮细胞受损在肾结石形成中的可能作用.方法 体外培养正常HK-2细胞至90%融合后,换无血清培养基,随机分为2组.实验组培养基内加入2 mmol/L草酸+200 mg/L COM结晶,37 ℃孵育.分别抽提2组细胞的总蛋白,双向凝胶电泳结合液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI-MS/MS)技术对2组中差异表达的蛋白质进行分离和鉴定.蛋白印迹法对鉴定出的蛋白进行验证.结果 成功建立细胞总蛋白的双向凝胶电泳图谱,经软件分析和质谱鉴定出差异蛋白质12个:FK506结合蛋白4、α-烯醇酶、M2型丙酮酸激酶、ATP合成酶α亚单位、3′,5′-二磷酸核苷酸酶1、核磷蛋白2、L-乳酸脱氢酶B、芽胞发芽蛋白3、Cofilin-1、Fascin、40S核糖体蛋白S17和胞液氨基肽酶1.差异蛋白涉及细胞能量代谢、细胞增殖、凋亡、钙离子通道活性调控、细胞运动及信号转导等多种生理活动.蛋白印迹法检测示HK-2细胞损伤后ENO1蛋白表达上调,而Cofilin-1表达下调,证实双向凝胶电泳和质谱分析可靠.结论 高浓度草酸和COM结晶可使正常人HK-2细胞蛋白表达发生改变,这些差异表达蛋白既可起到细胞的自我保护作用,又可能通过相应途径在肾结石的形成中起重要作用.
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