TM4SF1与JAK2-STAT3信号通路在肺癌细胞中的相互作用机制及它在非小细胞肺癌中的表达分析

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rongweihua
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目的旨在探究四次跨膜蛋白1(transmembrane 4 superfamily member 1,TM4SF1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)中的表达情况,并且尝试明确其与NSCLC病人临床病理表征内在的联系。搭建过表达TM4SF1的慢病毒表达载体,利用其转染肺癌A549细胞,探讨其与肺癌细胞A549迁移功能的产生的作用及在肺癌A549细胞株中通过JAK2-STAT3信号通路对下游Sox2表达水平的影响。方法收集61例NSCLC病人手术切除的癌组织、相应的癌旁组织以及因良性肺部疾病切除的正常肺组织10例(2018年6月-2018年12月)。分别提取癌组织、癌旁组织及良性肺组织内的mRNA,合成c DNA后利用实时免疫荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定mRNA层次TM4SF1的表达情况,探究TM4SF1在不同新鲜标本中RNA表达量的差别及与不同表达层次与临床病理的关联。利用Western blot法测定癌组织、癌旁组织及良性肺组织中蛋白层次TM4SF1的表达,探究其表达差异的意义。在肺癌A549细胞中使用慢病毒转染手段过表达TM4SF1基因。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western Blot实验测定目的基因TM4SF1的成功表达,TM4SF1高表达使A549迁移能力发生的变化则应用Transwell法进行检测。加入JAK2-STAT3信号通路干扰试剂AG490后应用实时免疫荧光定量PCR(qRT-PCR)法分析转染组、空白组、阴性对照组及其相应处理组TM4SF1、JAK2-STAT3信号通路中Stat3及下游Sox2基因的RNA表达水平。同时分析这三个指标的关联性。结果在新鲜标本内对TM4SF1表达的研究说明,癌组织中mRNA水平TM4SF1的表达高于对应的癌旁组织,mRNA水平的癌组织TM4SF1表达量为癌旁组织的±4.90倍,表达水平的差别具有统计学意义(t=5.752,P<0.05);且明显高于正常的肺组织标本,为正常肺组织的±5.17倍(t=3.541,P=0.0010.05)。mRNA层面TM4SF1的表达与患者的分化程度、肿块大小、淋巴结阳性率的高低、临床分期有较为紧密的联系(P0.05)。TM4SF1在肺癌细胞A549中成功过表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western-blot法检测转染组TM4SF1的表达水平,转染组的TM4SF1、Sox2及Stat3的mRNA表达显著高于阴性对照组(P<0.01)及空白组(P<0.01),且转染组的TM4SF1蛋白表达水平显著高于阴性对照组及空白组(P=0.001<0.01),在培养基中添加JAK2-STAT3信号通路干扰试剂AG490后继续培养三组细胞,药物干扰组细胞Stat3及下游Sox2表达水平较未处理组显著减低(P<0.05),说明JAK2-STAT3可能是TM4SF1调节其下游Sox2表达水平的信号通路。在过表达TM4SF1后利用Transwell验证肺癌A549细胞的运动增强,结果显示其迁移水平有显著提高。TM4SF1、Stat3及Sox2在mRNA水平的表达呈现正相关趋势(P<0.01)。结论在NSCLC中TM4SF1呈现高表达趋势,且肿块越大,其分化程度越低下,相应的淋巴结阳性率越多及临床分期较晚,在mRNA层面TM4SF1的表达偏高,让我们对NSCLC的恶性程度分级有了新标准。该基因过表达后可以明显上调肺癌A549细胞的迁移水平,且可能通过JAK2-STAT3通路影响甚至上调下方Sox2表达。TM4SF1、Stat3及Sox2三者在A549细胞中表达呈正相关。这条通路可能是TM4SF1通过促进NSCLC的发生发展及远处转移的关键通路,预示着在NSCLC的发生发展中TM4SF1可能起着重要的作用,并有希望充当癌症治疗的新靶点。
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