研究目的:探索γδT细胞对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡与自噬的影响。研究方法:采用Ficoll分离法获取健康成年人外周血单个核细胞（PBMNCs）,同时加入1μM唑来膦酸（Zol）与400 IU/ml白细胞介素（IL）-2对其刺激诱导以获取γδT细胞,培养第1、第6与第10天时运用流式细胞术对γδT细胞进行纯度的测定。收集培养至第10天γδT细胞,与骨髓瘤细胞RPMI 8226或U266按照不同比例于transwell小室中分别间接共培养,上室为γδT细胞,下室为骨髓瘤细胞。收集共培养的骨髓瘤细胞,CCK8法检测两株骨髓瘤细胞在γδT细胞干预下细胞的增殖率变化,采用流式细胞术对应用γδT细胞干预后的骨髓瘤细胞周期的分布和细胞凋亡率进行检测,运用Western blot方法对共培养组的两株骨髓瘤细胞的细胞自噬有关蛋白（LC3B、P62、PI3K、AKT、P-AKT、P-mTOR、Beclin-1、AMPK）、凋亡有关蛋白（Bax、cleaved caspase3、Bcl-2）和周期有关蛋白（Cyclin D1、CDK4、CDK1）的表达水平进行检测。收集γδT细胞干预24 h组的骨髓瘤细胞上清,应用ELISA检测肿瘤坏死因子（TNF）-α和干扰素（IFN）-γ的浓度。研究结果:在Zol和IL-2刺激诱导下,在体外培养条件下可以从PBMNCs培养获得大量扩增的γδT细胞,培养至第10天时,CD3+gammadelta+细胞比例高达95.2%。γδT细胞与RPMI 8226或U266细胞按效靶比为10:1和20:1间接共培养培养24 h,γδT细胞干预后的骨髓瘤细胞的增殖率明显比单独培养组小（p<0.01）。流式细胞术检测共培养组骨髓瘤细胞周期分布显示,共培养使骨髓瘤细胞周期中的G1期细胞所占百分比明显提高,S期与G2期细胞占比明显下调。应用γδT细胞干预还可以增加骨髓瘤细胞中的凋亡细胞的百分比。这些作用呈γδT细胞:骨髓瘤细胞的比例依赖。Western blot检测结果显示,在γδT细胞的干预下骨髓瘤细胞的细胞周期有关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK1的表达量会明显减少;凋亡相关蛋白检测显示,与γδT细胞共培养不但能使骨髓瘤细胞促凋亡相关蛋白Bax、cleaved cspase 3的表达水平显著升高,而且还能引起抗凋亡Bcl-2蛋白的表达量明显减少;自噬有关蛋白的检测显示,共培养组骨髓瘤细胞的自噬增强相关蛋白LC3B的表达量显著增加,自噬降解相关蛋白P62的表达量显著下降;自噬有关通路蛋白Western blot检测显示共培养的骨髓瘤细胞PI3K、P-AKT、P-mTOR的表达均显著下降,AMPK、Beclin-1表达水平显著升高（p<0.05）。ELISA检测结果表明,相对于单独培养组,共培养组骨髓瘤细胞培养液上清中IFN-γ和TNF-α的浓度显著升高（p<0.05）。结论:1.应用Zol与IL-2可以在体外对γδT细胞进行扩增。2.γδT细胞可将骨髓瘤细胞周期停滞在G1期,降低细胞的增殖活性。3.γδT细胞能够诱使骨髓瘤细胞发生凋亡。4.γδT细胞可能通过抑制骨髓瘤细胞PI3K/AKT/mTOR通路的活化和激活AMPK/Beclin-1通路,提高骨髓瘤细胞的自噬水平。5.γδT细胞降低细胞的增殖活性、诱使骨髓瘤细胞发生凋亡与自噬的作用可能与其分泌IFN-γ及TNF-α有关。