【摘 要】
：
目的:探索经β-NGF诱导后的PC12细胞机械损伤后内质网应激与PI3K/AKT/m TOR信号通路介导自噬之间的关系。研究内容:脊髓损伤一般会带来严重的功能障碍,而且目前没有特别有效的治疗方法。随着自噬的发现以及对于自噬在脊髓损伤的机制研究深入,包括在体内体外进行相关机制研究发现脊髓损伤早期,增强自噬有利于脊髓细胞存活,减少凋亡。在对自噬研究,由巨自噬深入到细胞内细胞器的参与的自噬,内质网是细胞
论文部分内容阅读
目的:探索经β-NGF诱导后的PC12细胞机械损伤后内质网应激与PI3K/AKT/m TOR信号通路介导自噬之间的关系。研究内容:脊髓损伤一般会带来严重的功能障碍,而且目前没有特别有效的治疗方法。随着自噬的发现以及对于自噬在脊髓损伤的机制研究深入,包括在体内体外进行相关机制研究发现脊髓损伤早期,增强自噬有利于脊髓细胞存活,减少凋亡。在对自噬研究,由巨自噬深入到细胞内细胞器的参与的自噬,内质网是细胞内合成及加工蛋白的细胞器,在外在损伤因素下,会出现蛋白异常导致内质网应激出现,内质网应激发现与多种神经退变性疾病有关,内质网应激与自噬之间有复杂的联系。本研究通过建立体外经β-NGF诱导后的PC12细胞损伤模型来探索内质网应激与自噬信号通路之间联系以及使用内质网应激抑制剂4-PBA对于自噬的影响。方法:1、PC12细胞常规培养与传代,后加入重组人β神经生长因子（β-NGF）进行诱导分化,常规培养至第5-7天,利用TUBB3及神经元特异抗体NSE免疫荧光鉴定。2、按照阙海萍方法建立体外机械损伤模型。在损伤后各个的时间点（0h、1h、4h、8h、24h）提取细胞蛋白。通过western blot方法检测自噬相关蛋白LC3及PI3K/AKT/m TOR的信号通路上相关蛋白、内质网应激相关蛋白（HSPA5/GRP78）的表达情况。3、分别使用LY294002及4-PBA预处理已经分化后的PC12细胞1h,建立机械损伤模型,分成6个组（sham组、SCI组、LY294002组、LY294002+SCI组、4-PBA组、4-PBA+SCI组）,在损伤后4h提取胞浆蛋白,检测自噬蛋白LC3及PI3K/AKT/m TOR的信号通路蛋白的变化。结果:1、经β-NGF诱导的PC12细胞,普通倒置显微镜观察,可见PC12细胞有突触形成,免疫荧光鉴定结果显示,大部分诱导分化后的PC12细胞能够被NSE及TUBB3标记染色。2、损伤后诱导自噬及内质网应激:WB结果显示自噬标志蛋白LC3II/I在4小时明显增加（P<0.05）,内质网应激相关蛋白HSPA5/GRP78在4小时后逐渐增加（P<0.05）。3、PI3K/AKT/m TOR信号通路的变化:WB结果显示,经β-NGF诱导的PC12细胞损伤后1h,p-AKT水平开始增加,4h达到峰值（p<0.05）,下游p-m TOR水平在损伤后1h后开始增加,4h达到峰值（p<0.05）。予LY294002（PI3K抑制剂）处理,下游p-AKT及p-m TOR水平受到抑制,LC3II/I明显增加,提示自噬水平明显增强（p<0.05）。4、内质网应激与PI3K信号通路介导的自噬:给予4-PBA,抑制内质网应激后,下游p-AKT及p-m TOR水平受到抑制,LC3II/I明显增加,自噬水平明显增强（p<0.05）,获得效果与PI3K抑制剂LY294002处理后效果相似。结论:1、经β-NGF诱导的PC12细胞在机械损伤后能够通过PI3K/AKT/m TOR信号通路介导自噬,能够诱导内质网应激的发生;2、4-PBA抑制内质网应激后,能够抑制PI3K信号通路下游蛋白AKT/m TOR的磷酸化水平,来增强自噬水平,有利于减少细胞凋亡。
其他文献
目的:通过采用药物预防和物理预防措施对下肢静脉曲张中危血栓风险患者术后下肢深静脉血栓（Deep venous thrombosis,DVT）形成进行前瞻性观察研究,比较两种不同的预防措施对下肢静脉曲张术后患者的DVT的发生率的差异及对凝血功能的影响,包括凝血酶原时间（Prothrombin time,PT）、国际标准化比值（International normalized ratio,INR）、活
目的鼻咽癌中CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞（Tumor infiltrating lymphocytes,TILs）的浸润与患者的预后呈正相关,而环氧化物酶-2（Cyclooxygenase 2,COX-2）则正相反,其表达上调,且与患者的不良预后相关。近年来,研究发现COX-2不仅与肿瘤的发生发展密切相关,而且还参与抑制性免疫微环境的形成,从而介导免疫逃逸。目前在其他实体瘤中的研究发现COX-2与C
目的:探索PDGF-BB对阿仑膦酸钠（alendronate,ALN）预处理后骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）增殖、迁移、成骨影响;研究PDGF-BB对预防SD大鼠拔牙后发生双膦酸盐相关性颌骨骨坏死（bisphosphonate related osteonecrosis of the jaw,BRONJ）的预防作用。方法:1.使用不同浓度(10-
目的:探索药物二甲双胍在慢性血栓栓塞性肺动脉高压（CTEPH）大鼠内皮间充质转化中的作用。方法:60只SD大鼠随机分为正常对照组、二甲双胍对照组、CTEPH组、二甲双胍低剂量组（50mg/kg/d）、二甲双胍高剂量组（100 mg/kg/d）。实验组大鼠麻醉后分离左颈总静脉,每只大鼠经左颈静脉注入自体血栓柱及含抗纤维溶解剂氨甲环酸的生理盐水,制备CTEPH模型,二甲双胍低剂量组和二甲双胍高剂量组每
目的:骨水泥注入治疗跟痛症是我院自行研究的一种治疗跟痛症的方法,本次研究目的是观察该治疗方法的临床疗效,研究探讨不同跟痛症分型、不同骨水泥注入量对临床疗效的影响。更好地为跟痛症的临床治疗提供理论依据及参考。方法:骨水泥注入治疗跟痛症现已进入临床试用阶段,并以此方法对12例跟痛症患者进行治疗。回顾性分析2018年02月至2019年02月在我院骨科门诊就诊的12例跟痛症患者,其中右足8例,左足4例;男
背景和目的间变性大细胞淋巴瘤（Anaplastic large cell lymphoma,ALCL）是一类CD30阳性的非霍奇金T细胞淋巴瘤,该类肿瘤在临床表现、分子遗传学特征和预后方面具有明显异质性。Zeste增强子同系物2（Enhancer of Zeste Homolog 2,EZH2）是一种表观遗传调节蛋白,可通过其组蛋白甲基转移酶功能催化组蛋白H3第27位赖氨酸发生三甲基化（H3K27
目的构建Markov模型并结合最新的III期临床试验（IMpassion130）数据,评价在美国和中国,阿特珠单抗联合白蛋白结合型紫杉醇（Atezolizumab plus Nab-paclitaxel,An P）用于晚期三阴性乳腺癌（Triple-negative Breast Cancer,TNBC）患者一线治疗的经济性。方法1.建立无进展生存、疾病进展和死亡的三状态Markov模型分别模拟晚
研究背景心肌梗死是威胁人类健康的首要疾病之一,对公共健康产生严重影响。一旦心肌受到梗塞的损害,由于心肌缺乏再生能力,并被成纤维细胞取代,导致疤痕形成,心室重构及功能障碍,最终导致不可逆的心力衰竭。因此,如何减少梗死区域坏死的心肌细胞,从根本上挽救坏死的心肌组织并改善心功能,是治疗缺血性心脏疾病所面临的挑战。人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,hiPSC
目的:腹腔镜下肝癌切除术根据手术方式的不同分为腹腔镜下解剖性肝切除术（laparoscopic anatomic hepatectomy,LAH）和腹腔镜下非解剖性肝切除术（laparoscopic nonanatomic hepatectomy,LNAH）。本文旨在探讨不同方式的腹腔镜下肝癌切除术治疗原发性肝细胞癌（Hepatocellular cancer,HCC）的效果并分析其影响因素。方法
恒牙列的建立从第一恒磨牙的萌出开始到第二恒磨牙的牙根发育完成结束,这一过程横跨6-12岁的学龄期及此后至20岁的青春期。由于牙列生长发育与年龄呈现相关性,在牙列建立的过程中,在该时段可见年轻恒牙和形态及结构上发育成熟的恒牙共存牙列中,又因相应的解剖结构,在致龋菌、糖类等直接致龋因素或联合诸如外伤、碳酸饮料等相关理化因素作用下,易导致牙髓的病变进而出现根尖周病变甚至最终可使患牙缺失。故及时保护、治疗