siRNA沉默YAP1基因对U87MG胶质瘤细胞生物学行为影响及其机制研究

来源 :广州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liyan2006
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目的:YAPl是Hippo—YAP信号转导通路下游的一个转录激活因子,能够调节细胞增殖和凋亡,调节上皮间质转化和细胞间接触。近年来发现其在多种恶性肿瘤中表达上调。本研究选择高表达YAPl基因的胶质瘤细胞系U87MG作为研究对象,通过RNAi方法沉默YAPl基因表达来观察其对U87MG细胞迁移的影响,并探讨其相关分子机制。  方法:1、设计合成3条针对靶基因YAPl mRNA的siRNA干扰序列,采用脂质体转染法,转染至U87MG胶质瘤细胞中,应用RT—qPCR方法检测siRNA的干扰效率。本实验选择最有效的干扰YAP1的siRNA用于稳定转染U87MG胶质瘤细胞。  2、采用RT-qPCR检测沉默YAP1表达对Ki-67,c-myc,VEGF,Cyclin Dl,Cyclin E和P73 mRNA的表达变化。  3、应用划痕实验检测沉默YAPl基因的表达对U87MG肿瘤细胞体外迁移能力的影响。  结果:经RT-qPCR法检测证实转染YAP1 siRNA后U87MG细胞中YAP1被有效敲低;CyclinDl,Cyclin E,Ki-67,c-myc,VEGF,以及P73在siRNA干扰24小时后mRNA出现不同程度下降。siRNA干扰48小时后,上述基因的mRNA水平上调。沉默YAP1基因的表达可明显抑制U87MG细胞的迁移能力。  结论:敲低U87MG肿瘤细胞中YAP1可以抑制U87MG肿瘤细胞增殖、生长和迁移能力,为进一步探究Hippo-YAP信号通路在胶质瘤中的转录调节的作用提供依据。
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