感音神经性聋是导致言语交流障碍的常见致残疾病，严重影响人类的生活质量，其实质多在于耳蜗毛细胞的变性、坏死，目前尚无根治办法。近年来人们在分子生物学、分子遗传学、基因工程技术等现代学科取得的发展，使我们能借助新的工具和手段对毛细胞再生进行进一步探索。本实验的目的主要是研究小分子物质在耳蜗毛细胞再生中的作用，涉及的小分子物质主要包括：DMSO、DAPT和miRNA。第一部分二甲基亚砜对在体耳蜗毛细胞的毒性作用研究目的：研究二甲基亚砜（DMSO）对在体耳蜗毛细胞的毒性作用。方法：正常SD大鼠40只,随机分成4组，人工外淋巴液对照组8只；0.1%DMSO溶液组8只；1%DMSO溶液组8只；5%DMSO溶液组16只。每个实验耳注入不同浓度DMSO溶液。术前1天和术后7天分别进行ABR（click和tone burst）检测。术后7天取耳蜗进行免疫组化和HE染色观察毛细胞变化。5%DMSO组导入术后2h、4h、6h、12h各取2耳行TUNEL染色。结果：人工外淋巴液和0.1%DMSO导入后于32k处引起<30dBSPL的阈移，其余各频率ABR未见明显提高，形态学未见明显异常；1%DMSO即可引起明显的HC损伤，以OHC丢失为主；5%DMSO所造成的损伤较1%组重，并导致明显的IHC缺失，后两种浓度均使ABR各频率阈值明显提高。冰冻切片示DMSO亦造成基底膜SC的损伤。5%组术后2h行TUNEL染色见阳性染色。结论：DMSO对毛细胞的损伤存在剂量依赖性，损伤程度自耳蜗底回向顶回逐渐减轻。DMSO不仅损伤HC，也对SC造成破坏。DMSO对耳蜗内细胞的毒性可能与诱发细胞凋亡有关。第二部分DAPT对在体耳蜗毛细胞再生的作用目的：探讨DAPT对耳蜗毛细胞再生的作用。方法：健康SD乳鼠大鼠（n=15）随机分成3组，渗透泵植入组5只，导入术后14天实验耳激光共聚焦显微镜下观察；鼓阶打孔连续给药和间断给药组各5只，术后7天实验耳激光共聚焦显微镜下观察。结果：渗透泵植入组实验耳基底膜可见异位myosinVIIa和phalloidin双阳性染色细胞，但发生率低；此外，部分实验耳顶回纤毛开口朝向发生明显改变，多数静纤毛束结构消失，仅见散在phalloidin阳性染色点。鼓阶打孔单次持续或间歇给药组因DMSO浓度较高造成HC、SC损伤严重，未见明显异位myosinVIIa或phalloidin阳性染色细胞。结论：DAPT可能对乳鼠毛细胞的静纤毛产生影响。渗透泵植入给药法由于能长期、定量地将药物稳定导入内耳，因此更适于研究DAPT在耳蜗毛细胞再生的作用。第三部分MiRNA在内耳毛细胞再生中作用的初步探讨目的：研究新生大鼠和成年大鼠耳蜗基底膜的miRNA表达变化，以期发现miRNA在耳蜗毛细胞再生中可能具有的作用。方法：取P0期及P30SD大鼠各9只，利用microarry对两种大鼠耳蜗基底膜的miRNA表达模式进行分析，并通过基因本体论分析和相关信号通路分析进行进一步探讨。结果：microarray分析发现有16种miRNA在成年大鼠中表达高于新生大鼠,2种miRNA在成年大鼠中表达略有下调。基因本体论分析发现差异性表达的miRNA功能涉及多个细胞生命活动过程，其中具有最大富集度的功能与调节TGF-β信号有关。相关信号通路分析发现有19个信号转导通路出现上调，而14个信号转导通路则出现了下调。结论：新生大鼠和成年大鼠听觉上皮miRNA表达存在差异，基因本体论分析和相应信号通路分析发现该变化可能与Corti器的发育成熟、细胞日常功能维持和内耳毛细胞增殖能力的丧失紧密相关，并且TGFβ信号在毛细胞再生中可能具有重要作用。