[目的]EPS8L1（Epidermal growth factor receptor pathway substrate 8-like protein 1）基因是表皮生长因子受体通路底物8的同源类似物,是本课题组在临床上皮性卵巢癌组织中筛选到的高响应基因,它能被多种激酶激活,并参与到肿瘤增殖、迁移、侵袭和化疗耐药的过程中。既往研究提示EPS8L1与卵巢癌细胞的迁移和转移密切相关,但其作用机制不明。本课题在前期工作基础上,利用数据库富集EPS8L1的相关通路,研究了 EPS8L1基因对卵巢癌细胞迁移和转移的影响以及相关的机制,为验证EPS8L1基因在卵巢癌中的生物学功能、作用机制及潜在的应用价值提供科学依据。[方法]1.采用GO聚类和KEGG通路富集,对EPS8L1进行生物信息学分析;2.以卵巢癌细胞株SKOV-3为基础、以慢病毒为载体,构建EPS8L1过表达（OE-EPS8L1）和EPS8L1敲低（Sh-EPS8L1）的卵巢癌细胞模型;3.利用Sh-EPS8L1细胞模型进行划痕和Transwell迁移实验,验证EPS8L1对细胞迁移能力的影响;4.采用FITC标记的鬼笔环肽染色Sh-EPS8L1细胞,研究EPS8L1对肌动蛋白形成的影响,并采用ELISA技术对肌动蛋白进行半定量;5.利用EPS8L1敲低的SKOV-3细胞构建裸鼠肺部转移模型,采用小动物活体成像技术,研究EPS8L1对细胞体内转移和器官定植能力的影响;6.利用数据库GEO、STRING、GEPIA等进行生物信息学挖掘和分析,筛选出与 EPS8L1 密切相关的下游基因-TIAM2（T-cell lymphoma invasion and metastasis 2,T 细胞淋巴瘤侵袭转移因子2）。并采用qRT-PCR和Western blot检测EPS8L1和TIAM2在OE-EPS8L-和Sh-EPS8L1细胞中mRNA和蛋白的表达水平;7.在EPS8L1和TIAM2敲低的SKOV-3细胞中,给予表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）刺激后,采用RAC1活性检测实验,探究EPS8L1和TIAM2敲低后对RAC1通路的影响。同时检测MAPK通路相关蛋白的表达,验证EPS8L1对MAPK通路的影响;给予Sh-EPS8L1细胞PI3K激动剂740Y-P,验证EPS8L1对细胞迁移和转移的作用机制。[结果]1.EPS8L1生物信息学分析结果显示,EPS8L1可通过细胞-胞外基质间的粘附力等影响肿瘤细胞的侵袭和转移能力;EPS8L1主要富集于血管平滑肌收缩、肌动蛋白细胞骨架等信号通路,与细胞的的迁移运动能力密切相关;2.划痕和Transwell实验结果显示,EPS8L1的敲低可抑制细胞的迁移能力;3.肌动蛋白染色和ELISA实验结果显示,EPS8L1的敲低抑制了细胞肌动蛋白的形成和细胞骨架的重塑。4.裸鼠尾静脉注射GFP荧光标记的Sh-EPS8L1细胞后,肺部定植的肿瘤细胞较少,全身未见明显的转移,EPS8L1的敲低可抑制细胞的转移能力;肺部转移瘤组织的免疫组化实验结果提示,EPS8L1促进卵巢癌细胞在小鼠体内的转移与其影响MMP-2和MMP-9的表达有关;5.基于生物信息学分析的结果,经过PCR和Western-blot验证后提示,EPS8L1可以调控下游分子TIAM2的表达;6.在EPS8L1敲低时,随着EGF刺激时间的延长,EPS8L1表达增加的同时TIAM2的表达增加;在总RAC1不变的情况下,RAC1-GTP的量随之增多;但TIAM2敲低时,在EGF的刺激下并没有观察到TIAM2和RAC1的激活;7.在EPS8L1敲低时,给予PI3K激活剂740Y-P后,可恢复下游TIAM2的表达水平,但未对EPS8L1的表达和RAC1的活化产生影响;8.Western-blot检测MAPK通路相关蛋白的表达,结果提示EPS8L1敲低后P38、Erk、Jnk的磷酸化水平均下降。经EGF刺激后,EPS8L1敲低组细胞中磷酸化水平的P38、Erk、Jnk含量仍然低于Control组;[结论]EPS8L1促进卵巢癌细胞的迁移和转移,此功能主要通过胞外信号如EGF刺激后,增强EPS8L1的磷酸化,激活下游TIAM2功能,使其发挥特异性GEF活性,进而激活RAC1-GDP向RAC1-GTP的转化,调节下游MAPK级联信号,这一过程直接影响到细胞骨架重塑,最终促进了卵巢癌细胞的迁移和转移。此外,EPS8L1促进卵巢癌细胞迁移和转移的作用可能还与其影响基质金属蛋白酶2和9（MMP2和MMP9）的表达有关。这些结果对于认识EPS8L1基因在卵巢癌发生、发展中的作用,寻找卵巢癌诊断、治疗和预后的生物标记物和靶点提供了重要的科学依据。