【摘 要】
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目的:本研究意在阐明mi R-149-5p在脑胶质瘤细胞中的作用,探讨MKI67、MMP-9是否参与脑胶质瘤细胞中mi R-149-5p的调控作用,为脑胶质瘤的治疗提供新的方向。方法:通过生物信息学软件预测mi R-149-5p的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因验证mi R-149-5p与靶基因MMP-9、MKI67的结合位点。q RT-PCR检测正常组织和胶质瘤组织中mi R-149-5p、MMP
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目的:本研究意在阐明mi R-149-5p在脑胶质瘤细胞中的作用,探讨MKI67、MMP-9是否参与脑胶质瘤细胞中mi R-149-5p的调控作用,为脑胶质瘤的治疗提供新的方向。方法:通过生物信息学软件预测mi R-149-5p的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因验证mi R-149-5p与靶基因MMP-9、MKI67的结合位点。q RT-PCR检测正常组织和胶质瘤组织中mi R-149-5p、MMP-9与MKI67基因中的表达,并分析mi R-149-5p、MMP-9与MKI67基因表达与胶质瘤患者的临床病理参数之间的相关性;Western Blot检测正常细胞与胶质瘤细胞中MMP-9与MKI67蛋白的表达。用收集南昌大学第一附属医院神经外科在2010年5月—2020年5月所做脑胶质瘤患者术中所切除的病理组织,将其根据恶性程度分为三组,第一组:低度恶性组——60例;第二组:高度恶性组——60例;第三组:复发组——30例。第四组为:正常脑组织组——30例（该标本来自颅脑外伤患者的破碎脑组织）。运用免疫法对以上标本进行检测,获取各个组织中MMP-9、MKI67的含量,并且对脑胶质瘤患者被切除组织进行病理分析。与此同时,胶质瘤细胞株转染后,q RT-PCR检测转染效率;MTT检测细胞增殖;划痕试验检测细胞迁移,Transwell检测细胞的侵袭。用t检验来对计量资料进行分析,用Pearson相关分析相关性检验,当P＜0.05时说明差异具有统计学意义。结果:荧光素酶活性的实验结果揭示了MMP-9和MKI67与mi RNA-149-5p之间存在直接结合位点。对MKI67的阳性检测结果为:低度恶性组（15.370±5.176）%;高度恶性组（26.130±4.624）%;复发组（29.520±4.441）%;正常脑组织组（0.000±0.000）%。对MMP-9检测结果为:低度恶性组（28.030±3.943）%;高度恶性组（39.320±3.987）%;复发组（41.230±5.377）%;正常脑组织组（1.245±0.390）%。检查结果表明:脑胶质瘤组织内MKI67阳性率与MMP-9阳性率的关系为正相关。且MKI67与MMP-9在人神经胶质瘤中的表达与神经胶质瘤的恶性程度呈正相关。q RT-PCR检测的结果显示与正常细胞相比,人神经胶质细胞瘤细胞系U251、U87和LN229的mi R-149-5p的表达水平显著降低;Western Blot的实验结果显示,人神经胶质瘤细胞系U251、U87中MMP-9与MKI67的表达水平与正常细胞相比显著提高。mi R-149-5p mimic显著降低胶质瘤细胞中MMP-9与MKI67的表达水平。此外,与mimic control组相比,mi R-149-5p mimic组的细胞活力、细胞迁移和侵袭率显著降低。结论:mi R-149-5p的靶基因MMP-9与MKI67蛋白表达在阳性细胞百分比表现为逐渐升高趋势。mi R-149-5p的过度表达导致MKI67和MMP-9表达水平显著下降,降低脑胶质瘤细胞活性及其细胞迁移与侵袭能力,从而抑制脑胶质瘤的发生发展。
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