论文部分内容阅读
本论文制备了两种能识别喹诺酮类和磺胺类兽药的单克隆抗体,并建立了分别检测喹诺酮类和磺胺类药物的酶联免疫法分析方法。采用活化酯法直接将诺氟沙星与载体蛋白BSA偶联,制备人工免疫原并免疫小鼠。将小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,通过筛选获得杂交瘤细胞。应用有限稀释法进行克隆,最终获得一株能稳定分泌识别喹诺酮类药物抗体的细胞株4C6F6D。亚型鉴定为：重链,IgG3,轻链,Kappa。通过优化抗体包被量、酶标抗原的稀释倍数、封闭液、pH等条件,建立了一种直接竞争ELISA法。该方法的灵敏度IC50=0.45±0.07μg/L,检出限IC15=0.09±0.02μg/L。CIP、NAL、ENR、PEF、ENO、OFL、 OXO、FLU、FLE和LOM的1C50值范围为0.27-8.54μ/L,交叉反应率为5.27-166.67%；MAR、SAR、DIF、GAT、PIP和SPA的IC50值范围为14.21-88.13μg/L,交叉反应率为0.51-3.17%。应用活化酯法将两种磺胺类人工半抗原与载体蛋白KLH进行偶联,制备人工免疫原并免疫小鼠。将优选后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选出杂交瘤细胞,最终获得一株能稳定分泌抗体的单克隆细胞株4E7G4D。亚型鉴定为：重链,IgG2a,轻链,Kappa。间接竞争EHSA法通过优化异源和同源性包被原、包被量、抗体稀释倍数、封闭液、pH等条件,建立了8种磺胺类药物的标准曲线。SQ、SCPA、 SPMX、SMT、SME、SDDX、SMX和STZ的IC50值范围为3.22-398.36μg/L,交叉反应率为0.81-100%。直接竞争ELISA法通过优化异源和同源性酶标抗原、抗体包被量、酶标稀释倍数、封闭液、pH等条件,建立了8种磺胺类药物的标准曲线。SQ、SCPA、SPMX、SMT、SME、SDDX、SMX和STZ的1C50值范围为4.58-497.73μg/L,交叉反应率为0.92-100%。本研究中所建立的喹诺酮类和磺胺类兽药的酶联免疫检测方法灵敏度高、广谱性好,适于快速检测动物源性食品中两种兽药的多残留检测。