猪流感是由猪流感病毒感染猪引起的一种高度接触性传染病,其临床症状主要为咳嗽,发热,呼吸困难等,不同品种,性别,年龄的猪均易感,是当今猪场普遍存在且难以根除的疾病之一。由于猪呼吸道中同时存在禽流感病毒和人流感病毒唾液酸受体,被认为是新型流感病毒重组的“混合器”。人类史上发生的4次人流感大流行均与猪流感病毒密切相关,严重危害人和动物的健康。流感病毒感染宿主可引起microRNA（miRNA）表达谱的明显变化,病毒可能通过调控某些miRNA表达量的变化从而实现免疫逃逸增强其对宿主的感染能力;同时宿主自身也可以通过调控某些miRNA的表达变化从而启动对抗病毒的反应机制。课题组前期研究发现,H1N1猪流感病毒攻毒小鼠与对照组小鼠相比,miR-124-3p表达量显著上调（约3.8倍）,其调控的靶基因之一是STAT3,是Th17细胞分化的关键转录因子之一。因此推测,miR-124-3p可能通过调节Th17细胞的分化从而减轻流感病毒感染所致的炎症反应。本项目以猪流感病毒感染小鼠模型,探讨miR-124-3p对H1N1猪流感病毒感染小鼠Th17细胞免疫应答调控作用。实验使用SPF鸡胚增殖H1N1猪流感病毒并对其EID50进行测定,结果表明,A/Swine/GD/2/12（H1N1）猪流感病毒的EID50为10-7.2/200μL。18只4周龄C57BL/6雌性小鼠随机分成2组,每组9只。分别为猪流感病毒感染组和对照组。对感染组在0h、24h和48h三个时间点分别对其中3只小鼠以106.9EID50（100μL）攻毒剂量鼻腔接种猪流感病毒,分别记录为感染组3,感染组2和感染组1;对照组在相同时间点接种相同剂量鸡胚尿囊液,分别记录为对照组3,对照组2和对照组1。在最后一次攻毒24h后处死小鼠,获取肺脏灌洗液细胞和适量脾脏单细胞悬液,运用流式细胞术检测Th17细胞占比结果;并采用RT-qPCR法对感染组3和对照组3肺脏组织中相关炎症细胞因子和Th17细胞关键转录因子mRNA表达水平进行检测分析。结果表明,H1N1猪流感病毒诱发脾脏组织Th17细胞各组组间差异不显著;在肺脏灌洗液细胞中,H1N1流感病毒诱发感染组1和感染组2的Th17细胞分别与对照组1和对照组2组间差异不显著,而感染组3相对于对照组3 Th17细胞占比增加,两组差异显著（P<0.05）;相比较对照组3,感染组3检测的促炎因子IL-1β、IL-6和IL-17A的mRNA表达量均上调,其中IL-6显著上调（P<0.05）;STAT3和RORγt的mRNA表达量上调,但差异不显著（P>0.05）。密度梯度离心获取小鼠脾脏单淋巴细胞悬液,运用免疫磁珠法分选na（?）ve T细胞,用腺病毒表达载体转染na（?）ve T细胞介导miR-124-3p过表达、抑制表达并设空白对照组,加入Th17细胞分化相关细胞因子诱导na（?）ve T细胞向Th17细胞方向极化,运用流式细胞术对极化后的Th17细胞占比并用ELISA方法对细胞培养上清中IL-17A浓度进行检测分析。结果表明,免疫磁珠法纯化na（?）ve T细胞纯度>90%;miR-124-3p过表达腺病毒载体转染na（?）ve T细胞可显著提高其miR-124-3p的表达量（P<0.05）;流式细胞术和ELISA检测结果均表明,相比较空白对照组,过表达miR-124-3p可显著抑制Th17细胞体外分化,而抑制miR-124-3p表达可显著促进Th17细胞体外分化。综上所述,H1N1猪流感病毒感染小鼠可促进小鼠肺脏灌洗液细胞中Th17细胞的显著增加,但对脾脏组织无明显影响。体外研究表明,miR-124-3p表达量增加可以抑制Th17细胞分化。因此,猪流感病毒感染小鼠显著上调的miR-124-3p通过抑制Th17细胞分化从而减轻猪流感病毒感染所致的炎症反应。