【摘 要】
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植酸酶是一种能将植酸磷(六磷酸肌醇)降解为肌醇和无机磷酸的酸性磷酸酶类.在饲料中添加植酸酶不但可以提高动物对磷的吸收,降低环境中磷的污染,而且能解除植酸对金属离子、
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植酸酶是一种能将植酸磷(六磷酸肌醇)降解为肌醇和无机磷酸的酸性磷酸酶类.在饲料中添加植酸酶不但可以提高动物对磷的吸收,降低环境中磷的污染,而且能解除植酸对金属离子、氨基酸的螯合作用,大大提高饲料的利用效率.自然界中大量高活性的植酸酶主要存在于真菌中,大多数是丝状真菌.国内外科技工作者对植酸酶基因克隆及其表达的研究已有许多成功的报道,大幅度提高了植酸酶的产量,并且实现了工业化的生产.一般认为黑曲霉(Aspergillus niger)产生的植酸酶活性最强,因此工业化生产的工程菌中植酸酶基因大都来自于黑曲霉,但是这种来源于黑曲霉的植酸酶不能耐受较高的温度,在干燥和制粒加工过程中酶活大量丧失.而烟熏曲霉(A.fumigatus)中分离的植酸酶能够耐受90℃~100℃的高温,并且能在较宽的pH范围内降解植酸,具有较大的市场潜力.该研究根据已发表的植酸酶phyA基因全序列设计一对引物,用PCR方法从烟熏曲霉(A.fumigatus)CCTCC AF93024总DNA中扩增到去除信号肽和内含子后约1.3kb的phyA基因编码区片段,对该片段进行了克隆及序列测定.以此片段成功构建了pPIC9K-phyA表达载体,并转化毕赤酵母GS115(Pichia pastoris).通过表达产物的酶活性检测和SDS-PAGE电泳分析,重组转化子中植酸酶得到了有效分泌和高效表达.摇瓶诱导发酵48h发酵液中植酸酶的活性可以达到113u/mL;表达产物在pH2.0~8.0均有活性,最适作用pH为6.0,最适作用温度为60℃,并且具有较好的耐热性,90℃处理10min后仍有74﹪的活性.
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