肝癌是导致全世界肿瘤相关死亡的主要原因之一,近年来,许多国家的肝癌发病率呈增加态势。肝癌分为原发性肝癌和继发性肝癌,原发性肝癌是指起源于肝细胞和肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤,它是由多种因素引起的,如乙肝病毒感染、黄曲霉毒素污染等,继发性肝癌是指人体各部位的恶性肿瘤转移到肝脏的癌症。现在肝癌的发病机制尚不十分明确,因此,对肝癌发生和发展的分子机制的研究,有助于发现潜在的针对性的治疗靶标。蛋白质泛素化是一种可逆的蛋白翻译后修饰,在细胞信号转导和蛋白质稳定性调控中发挥着关键作用。数百个泛素连接酶控制着蛋白质的泛素化。已知的去泛素化酶分为7个家族,本研究关注的CYLD（cylindromatosis）蛋白属于去泛素化酶USP家族（ubiquitin-specific proteases）,它能识别并与底物蛋白发生相互作用,特异性的去除K63连接的泛素链,从而调控NF-κB（nuclear factor-κB）、TGF-β（transforming growth factorβ）、JNK（c-Jun N-terminal kinase）等多条重要的信号通路。CYLD蛋白作为肿瘤抑制因子,能调控多种肿瘤如圆柱瘤、乳腺癌、宫颈癌等肿瘤的发生发展。本实验室前期研究通过邻近蛋白标记技术（Proximity-dependent biotin identification,Bio ID）,发现CYLD蛋白与Hippo信号通路分子存在相互作用,推测CYLD可能调控Hippo信号通路的激活。Hippo信号通路在调节组织生长、器官大小和细胞代谢等功能方面发挥着重要的作用。Hippo信号通路的激活涉及一系列激酶级联反应,包括多个转录辅激活因子和转录因子,YAP（yes associated protein）/TAZ（transcriptional coactivator with PDZ-binding motif）是Hippo通路的核心转录调控因子。当Hippo信号通路被激活时,磷酸化的蛋白激酶LATS1/2（large tumor suppressor kinase1/2）会使YAP和TAZ磷酸化,磷酸化的YAP/TAZ与14-3-3蛋白结合而滞留在胞质中,进而被泛素化修饰并降解。另一方面,当Hippo信号通路关闭,YAP/TAZ被去磷酸化并转运至细胞核,与下游TEAD（TEA domain family member）转录因子家族成员结合,促进下游靶基因的激活。有研究报道Hippo通路的活化异常导致肿瘤的发生。本研究在实验室前期研究的基础上,对CYLD调控Hippo通路激活的分子机制进行了确证和深入研究,并进一步对CYLD调控肝癌发生发展的机制进行了探索。本文首先通过TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库中对CYLD和Hippo通路的主要分子MST1、LATS1、YAP、TAZ和TEAD家族进行了TCGA-LIHC的RNA-seq数据分析,发现CYLD可能在肝癌发生发展中发挥抑癌因子的作用。同时,我们也发现Hippo信号通路的分子均在肝癌中存在差异表达,除了MST1外的其它分子均在肝癌组织中高表达,而调控YAP磷酸化的上游的MST1激酶呈癌旁组织高于癌组织趋势。YAP、TAZ及其下游转录调控分子均呈癌组织高于癌旁组织趋势,提示Hippo通路下游转录调控因子活性的异常升高,可能促进肝细胞癌往恶性发展,这与Hippo通路抑癌功能的已有报道吻合。我们在Hep G2和MHCC-97H肝癌细胞系中做了细胞增殖、细胞迁移和细胞侵袭实验进行验证,结果表明敲除CYLD对细胞增殖没有影响,而敲除CYLD显著促进癌细胞的迁移和侵袭。进一步,我们探讨CYLD调控肝细胞癌的过程是否通过LIMD1（LIM domain-containing protein）对Hippo信号通路的调控,通过YAP蛋白磷酸化实验和细胞定位实验结果表明CYLD部分依赖于LIMD1调控Hippo信号通路的激活。最后,我们在两种肝癌细胞系中做了细胞增殖和细胞迁移实验,结果表明CYLD通过LIMD1调控Hippo通路,进而调控肝癌迁移和侵袭。