林蛙“红腿病”是危害林蛙养殖业的主要疾病之一,该病传播快、死亡率高,对林蛙的养殖业的危害严重。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila, AH)是林蛙“红腿病”的主要致病菌。该菌的致病力与毒力因子关系密切,尤其是气溶素(Aer)。气溶素由463个氨基酸组成,分子质量为51.5 ku,是嗜水气单胞菌主要的毒力因子之一,具有溶血性、细胞毒性和肠毒性。该菌的血清型多,在不同的地区、不同的宿主都有所差异,这对灭活苗的使用造成了很大的限制。找出不同血清型菌株共同的保护性抗原,研制出新型亚单位疫苗是现在研究的迫切需求。本试验根据GenBank上报道的嗜水气单胞菌气溶素基因序列(NCBI登录号：DQ186611),针对该基因的保守区,设计了一对扩增气溶素基因的特异性引物,以从林蛙体内分离的嗜水气单胞菌基因组DNA为模版,用PCR方法扩增目的片段,将该基因克隆pMD18-T载体上,经PCR、酶切及序列测定的鉴定和分析,结果表明成功地克隆了1163 bp的林蛙嗜水气单胞菌气溶素基因,对所克隆的气溶素基因序列与基因库中已发表的DQ186611进行比较分析同源性高达99%。再将该基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,经PCR鉴定及酶切鉴定,证明成功地构建了原核表达载体pGEX-Aer。将构建好的原核表达载体,经1 mmol/L的IPTG诱导,在大肠杆菌BL21中进行表达,经过8 h表达量达到最高。该融合蛋白pGEX-Aer的分子量约为69 ku,表达蛋白主要以包涵体形式存在。经Western blotting免疫印记分析,该融合蛋白具有较好的反应原性。将表达蛋白经亲和层析纯化后免疫小鼠,.应用间接ELISA和淋巴细胞增殖试验(MTr)来检测体液免疫和细胞免疫水平。结果表明,表达蛋白能够刺激机体产生较好的体液免疫及细胞免疫水平。证明该融合蛋白具有较好的抗原性,为林蛙嗜水气单胞菌疫苗的研制提供了前期工作。