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[背景和目的]
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球女性恶性肿瘤中其发病率仅次于乳腺癌，在发展中国家则居首位。研究发现宫颈癌是一种与人乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus HPV）密切相关的肿瘤。
关于宫颈癌的治疗，目前的研究热点为生物治疗和基因治疗。生物治疗的重要进展之一是肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand TRAIL)的发现及其在肿瘤治疗中的作用，研究表明，TRAIL对人类大多数肿瘤细胞均有抗肿瘤活性，能够抑制其生长并且诱导凋亡，显示出较强的细胞毒作用，但对人体的正常细胞则没有明显的杀伤作用。RNAi是一种新型的用于肿瘤基因治疗的方法。针对肿瘤细胞特定原癌基因的SiRNA转染进入肿瘤细胞后，可导致靶基因沉默，从而抑制肿瘤细胞的生长及侵袭，诱导凋亡，增加放化疗敏感性，起到抗癌作用。HPV早期蛋白E5、E6、E7为其主要致瘤蛋白，在宫颈癌发生发展过程中其重要作用，为HPV相关宫颈癌基因治疗的重要靶点。
本研究拟探讨靶向HPV16-E5的SiRNA对TRAIL蛋白诱导子宫颈癌Caski细胞株凋亡作用的影响，并探讨其作用机理。为临床上两者的联合应用提供理论依据。
[方法]
1、化学合成针对HPV16-E5基因的SiRNA-E5序列，脂质体lipofectamine转染SiRNA至Caski细胞(SiRNA-E5组)，转染后48h，采用RT-PCR检测E5mRNA的表达水平，以无关序列转染细胞作为阴性对照(SiRNA-NTC组)，以未予任何处理的细胞作为空白对照;
2、依照处理方法不同，将细胞分为空白细胞对照组、SiRNA-E5单独处理细胞组、TRAIL单独处理细胞组、SiRNA-E5+TRAIL联合处理细胞组、SiRNA-NTC+TRAI联合处理细胞组，48小时后流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;
3、RT-PCR及western blot检测转染48小时后，转染SiRNA-E5组、转染无关序列对照组及空白细胞对照组细胞表面TRAIL死亡受体DR4，DR5 mRNA、蛋白的表达水平;
4、细胞分组如方法2，Caspase-8活性检测试剂盒检测不同处理组Caski细胞Caspase-8的活性水平。
[结果]
1、RT-PCR检测结果显示:转染后48 h，SiRNA-E5组HPV16-E5 mRNA的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P＜0.05);
2、流式细胞检测结果显示:SiRNA-E5+TRAIL联合处理细胞组较TRAIL单独作用细胞组相比细胞凋亡率明显增加(P＜0.05），而无关序列RNA+TRAIL处理组较TRAIL单独作用组细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）;
3、 SiRNA-E5组细胞表面TRAIL死亡受体DR4、DR5 mRNA和蛋白的表达水平较无关序列对照组、空白细胞对照组无明显差异(P＞0.05);
4、Caspase-8活性水平在SiRNA-E5+TRAIL联合作用组明显较TRAIL单独作用组高，差异有统计学意义(P＜0.05)，而无关序列RNA+TRAIL处理组较TRAIL单独作用组细胞Caspase-8活性水平无明显变化(P＞0.05)。
[结论]
1、在癌症细胞中表达常缺失的HPV-E5蛋白在HPV16阳性的宫颈癌Caski细胞中表达为阳性;
2、HPV16-E5特异性SiRNA可显著抑制Caski细胞中HPV16-E5基因的表达;
3、靶向HPV16-E5的SiRNA可以增强TRAIL诱导宫颈癌Caski细胞的凋亡作用;
4、靶向HPV16-E5的SiRNA增强Caski细胞对TRAIL诱导凋亡敏感性的机制与增强Caspase-8活性水平有关，而对死亡受体的表达无影响;
5、HPV16 E5蛋白可以使被感染细胞具有抗凋亡能力，是HPV的主要致瘤蛋白之一。