亚砷酸钠对人正常膀胱上皮细胞细胞周期G1期的影响及其调控机制

来源 :中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huihuiwang
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  [目的]研究亚砷酸钠(NaAsO2)对人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)细胞周期G1期的影响.[材料和方法]处于对数生长期的SV-HUC-1细胞经不同浓度NaAsO2(0、1、2、4、8、10 μmol/L)处理24h,MTT方法和BrdU免疫荧光法检测各剂量砷处理组细胞的活力和增殖情况,采用流式细胞法检测细胞的细胞周期变化,采用逆转录PCR (RT-PCR)方法检测细胞G1期细胞周期蛋白细胞周期素D1(CyclinD1)mRNA表达情况,采用蛋白免疫印迹(Westernblot)检测G1期关键蛋白CDK4、P16、P27总蛋白含量和P21胞浆蛋白含量.[结果]MTT实验发现在1(p<0.01)和2μmol/L (p<0.05)处理组细胞活力显著高于0μmol/L处理组,而8和10μmol/L处理组细胞活力显著下降,差异有统计学意义(p<0.0 1).BrdU免疫荧光实验结果显示4μmol/L处理组BrdU阳性率显著高于0μmol/L组,差异有统计学意义(p<0.01),10 μmol/L处理组BrdU阳性率显著低于0μmol/L组,差异有统计学意义(p<0.05).选择0和4μmol/剂量NaAsO2处理SV-HUC-1细胞,流式的方法检测细胞周期发现与0 μmol/L NaAsO2组比较,4μmol/L NaAsO2组G1期细胞所占比例明显下降(p<0.01),而S期细胞比例明显增多(p<0.01).RT-PCR和Weternblot结果显示Cyclin D1 mRNA和蛋白在4mol/L剂量下达到晟高(p<0.05),在0-4 μmol/L NaAsO2处理组CDK4蛋白表达基本没有变化,而8(p< 0.05)和10 μmol/L (p< 0.01)组表达下降,差异有统计学意义.P16和P27蛋白与NaAsO2处理剂量呈显著负相关(r=-0.8,p<0.01;r=-0.652,p<0.01).P21的功能主要取决于它在细胞内定位,在细胞质中时作为一种致癌基因,调节细胞的迁移和增殖,本研究发现胞内P21蛋白含量从1-4μmol/L显著增加(p<0.01).[结论]低剂量亚砷酸钠能增强细胞活力,促进细胞增殖,原因可能是亚砷酸钠能增加G1期促癌基因CyclinD1表达和胞浆蛋白P21表达,抑制抑癌基因P16和P27蛋白表达,进而使G1期缩短,加速细胞周期,进而促进了膀胱上皮细胞的增殖.
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