上皮-间充质转变(EMT)在百草枯诱导肺纤维化中的作用及机制探讨

来源 :中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dingsiwei2009
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  [目的]探索上皮间质转化(EMT,Epithelial-mesenchymal transaction)在百草枯(PQ,Paraquat)诱导致肺纤维化中发生发展的重要作用,初步探讨其可能的分子生物学机制.[方法]体外培养RLE-6TN细胞,用终浓度为0、25、50、100 uM PQ分别处理细胞6、12、24h.倒置相差显微镜观察百草枯终浓度为50uM作用于RLE-6TN细胞0、6、12、24h后细胞形态学的改变;为了观察PQ染毒对EMT的影响,将RLE-6TN细胞分成四组:(1)正常对照组(control); (2)25uM染毒组;(3)50uM PQ染毒组;(4) 100uM PQ染毒组;western blot检测上皮细胞标记物E-钙粘蛋白,MFb(肌成纤维细胞)标记物α-SMA的表达水平;RT-PCR检测细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9、间质细胞标记物COL-Ⅲ和活动性肺纤维化病灶内COL Ⅰ胶原表达水平.[结果]PQ染毒12小时,对照组细胞如鹅卵石形态,而经PQ染毒的细胞细长且有突触;随着百草枯剂量和时间增加,损伤加重(p<0.05),具有剂量依赖性和时间依赖性;Westem blot显示,终浓度PQ为25、50、100μmol/L作用RLE-6TN细胞6h后E-钙粘蛋白表达水平明显降低,α-SMA蛋白表达水平增高,差异有统计学意义(p<0.05),加入ERK1/2抑制剂PD98059和U0126后E-钙粘蛋白表达水平增高,α-SMA蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(p<0.05); RT-PCR检测MMP-2和MMP-9表达水平增加,差异有统计学意义(p<0.05),COL-Ⅰ和COL-Ⅲ均高表达,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]上皮细胞通过EMT转变为间质细胞,可能是MFb的一个重要来源.
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