【摘 要】
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背景:脂肪间充质干细胞衍生外泌体(adipose-derived mesenchymal stem cells released exosomes,AMSC-Exos)中miR-126-3p可作为糖尿病的一种潜在生物标志物,但其对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的作用及其相关机制研究较少.目的:探究AMSC-Exos中miR-126-3p对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的效用及作用机制.方法:①以30 mmol/L葡萄糖与100μmol/L棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞糖脂毒性体外模型;②收集第4代脂肪间充质干细胞上清液提
【机 构】
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江苏护理职业学院医学基础部,江苏省淮安市 223005
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背景:脂肪间充质干细胞衍生外泌体(adipose-derived mesenchymal stem cells released exosomes,AMSC-Exos)中miR-126-3p可作为糖尿病的一种潜在生物标志物,但其对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的作用及其相关机制研究较少.目的:探究AMSC-Exos中miR-126-3p对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的效用及作用机制.方法:①以30 mmol/L葡萄糖与100μmol/L棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞糖脂毒性体外模型;②收集第4代脂肪间充质干细胞上清液提取外泌体,透射电镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析外泌体粒径分布范围;③AMSC-Exos处理糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,流式细胞术检测活性氧水平及细胞凋亡率,ELISA检测培养上清中炎症因子水平;④RT-qPCR分析AMSC-Exos、与脂肪间充质干细胞共培养后正常人脐静脉内皮细胞中miR-126-3p mRNA相对表达水平;⑤miR-126-3p转染糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,CCK-8检测细胞增殖情况,Western blot检测凋亡蛋白的表达量;⑥生物信息学软件预测和分析miR-126-3p靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证,并预测信号通路;⑦CRK转染糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,Western blot检测凋亡蛋白及p-AKT的表达量;⑧AKT通路抑制剂RG7440与miR-126-3p过表达/AMSC-Exos共处理糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,Western blot检测凋亡蛋白的表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 与结论:①AMSC-Exos为形态一致的圆形或椭圆形膜性囊泡,粒径范围30-200 nm;②与模型组相比,AMSC-Exos可明显降低白细胞介素1β、白细胞介素6和白细胞介素8的表达量(P<0.05,P<0.001),并能显著降低活性氧水平和细胞凋亡率(P<0.05);③与单纯脂肪间充质干细胞相比,AMSC-Exos内miR-126-3p的mRNA相对表达量显著升高(P<0.001),与单纯人脐静脉内皮细胞相比,与脂肪间充质干细胞共培养可明显提高人脐静脉内皮细胞中miR-126-3p表达量(P<0.001);④miR-126-3p过表达可明显促进糖脂毒性人脐静脉内皮细胞增殖,降低细胞凋亡率,同时显著降低Cleaved caspase 3,9蛋白表达量(P<0.01,P<0.001);⑤生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验证实CRK为miR-126-3p靶基因,同时确认AKT途径作为下一步研究对象;⑥CRK过表达可激活AKT途径并上调Cleaved caspase 3,9蛋白表达量;与外泌体组相比,外泌体+AKT抑制剂组细胞凋亡率显著升高(P<0.001);⑦结果表明,来源于AMSC-Exos的miR-126-3p能够改善人脐静脉内皮细胞的糖脂毒性,推测其机制可能是miR-126-3p通过靶向CRK基因调节AKT途径而发挥作用.
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背景:早期自然流产与母胎界面血管形成障碍或异常有关,人脐带华通氏胶间充质干细胞具有向损伤部位迁移及促血管生成的作用,目前人脐带华通氏胶间充质干细胞作用于早期自然流产蜕膜基质细胞的研究尚未有报道.目的:探讨人脐带华通氏胶间充质干细胞对早期自然流产蜕膜基质细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子表达的影响,以及对早期自然流产小鼠妊娠结局的影响.方法:①分离培养早期自然流产和人工流产蜕膜组织,实时荧光定量PCR和Western blot检测蜕膜组织中血管内皮生长因子的表达;②第3代人脐带华通氏胶间充质干细胞和原代自然流
背景:脊髓损伤后胶质瘢痕形成物理屏障抑制轴突跨越损伤部位,被认为是神经修复过程中的不利因素.目的:研究siRNA干扰波形蛋白表达对反应性星形胶质细胞的影响,探讨其在脊髓损伤后胶质瘢痕形成中的意义.方法:①选取生长良好的第3代星形胶质细胞,分为未转染组、siRNA-NC组、siRNA-Vimentin组,利用siRNA干扰技术沉默星形胶质细胞中波形蛋白表达,转染24 h进行波形蛋白免疫荧光染色,采用划痕法观察细胞迁移及增殖情况.②SD大鼠随机分为3组:正常组10只,只打开椎板,不损伤脊髓;模型组20只,制备
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背景:制备可降解材料骨组织工程支架,应用于修复骨肉瘤造成的骨缺损是当前骨组织工程研究热点.目的:确定壳聚糖/聚乳酸/羟基磷灰石/聚乙烯醇复合材料的配比,优化骨支架力学性能.方法:基于挤出式3D打印技术制备壳聚糖/聚乳酸/羟基磷灰石/聚乙烯醇骨支架,以最大抗压强度为评价指标,设计正交实验,以乙酸浓度(1.5％,2％,2.5％,3％)、壳聚糖溶液浓度(2％,3％,4％,5％)、羟基磷灰石:聚乳酸质量比(1:5,1:6,1:7,1:8)、羟基磷灰石/聚乳酸:壳聚糖溶液:聚乙烯醇凝胶质量体积比(1 g:1 g:0