大鼠bcl-xL cDNA的克隆和高滴度重组bcl-x L/腺相关病毒的制备

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ouyang1225

【摘要】

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以RT-PCR法从大鼠脑组织中克隆bcl-XL基因,将其定向插入带rep-cap基因和neu基因的三功能腺相关病毒(AAV)载体,转染HeLa细胞并以G418筛选,然后用腺病毒感染筛选后的细胞克隆,

【作者】

：

何湘君 Kunlin JIN Steven H.GRAHAM

【机构】

：

北京大学人民医院中心实验室,北京,100044Department of Neurology, University of Pittsburgh; Pittsburgh, PA 15213, USA;

【出处】

：

中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

2001年4期

【关键词】

：

bcl-Xl 腺相关病毒病毒滴度制备

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以RT-PCR法从大鼠脑组织中克隆bcl-XL基因,将其定向插入带rep-cap基因和neu基因的三功能腺相关病毒(AAV)载体,转染HeLa细胞并以G418筛选,然后用腺病毒感染筛选后的细胞克隆,包装成重组腺相关病毒.用带rep-cap基因的C12细胞筛选和滴定产生重组腺相关病毒的细胞克隆,粗制细胞裂解物中病毒滴度最高只有3×105IU/ml.从产病毒量较高的克隆大量制备重组病毒,经肝素柱高压液相亲和层析法纯化、浓缩病毒后获得了高达4×1011IU/ml的重组病毒.为研究脑缺血动物模型中BCL-XL的抗脑细胞凋亡作用打下了基础.

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