【摘 要】
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目的 以埃博拉病毒(EBOV) VP40基因原核表达产物为抗原建立检测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法. 方法 在分析EBOV VP40基因稀有密码子(大肠埃希菌系统)的基础上去除5 '和3'
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,吉林长春130122
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目的 以埃博拉病毒(EBOV) VP40基因原核表达产物为抗原建立检测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法. 方法 在分析EBOV VP40基因稀有密码子(大肠埃希菌系统)的基础上去除5 '和3'端稀有密码子,合成VP40基因,构建VP40蛋白原核表达载体pET22b-VP40,并转化至BL21 (DE3)菌,在1.0 mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.以纯化蛋白为抗原,建立检测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法. 结果 成功构建重组质粒pET22b(+)-VP40,表达的VP40蛋白经SDS-PAGE鉴定分子质量单位为40 ku,与预期值相符；Western blot检测证实VP40重组蛋白能被抗VP40单克隆抗体识别.以该蛋白为包被抗原建立监测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法,其敏感性和特异性均为100％. 结论 成功构建了pET22b(+)-VP的重组质粒,并诱导表达VP40蛋白.该蛋白具有免疫反应性,以该蛋白为抗原建立的ELISA方法具有较高的特异性和稳定性,可用于埃博拉出血热的诊断和流行病学调查.
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