【摘 要】
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目的 探究巨自噬和分子伴侣介导自噬（chaperone-mediated autophagy, CMA）这两种自噬途径在人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）氧化应激损伤中特点。方法 通过不同浓度（0、20、50、100、200μg/mL）氧化低密度脂蛋白（oxidation low lipoprotein, OX-LDL）
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目的 探究巨自噬和分子伴侣介导自噬（chaperone-mediated autophagy, CMA）这两种自噬途径在人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）氧化应激损伤中特点。方法 通过不同浓度（0、20、50、100、200μg/mL）氧化低密度脂蛋白（oxidation low lipoprotein, OX-LDL）作用HUVECs后产生的活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平筛选诱导HUVECs氧化应激的适宜浓度。设立空白对照组（不做任何处理）、单纯抑制巨自噬组（10 mmol/L 3-MA）、氧化应激组（50μg/mL OX-LDL）和抑制巨自噬-氧化应激组（10 mmol/L 3-MA+50μg/mL OX-LDL）,检测各组细胞增殖标志蛋白PCNA、凋亡标志蛋白Caspase-3、巨自噬标志蛋白Beclin-1、分子伴侣介导自噬两种标志蛋白Hsc70和Lamp-2蛋白表达，评估不同处理下HUVECs增殖、凋亡及两种自噬的变化。其中氧化应激组和抑制巨自噬-氧化应激组处理不同时间（1、3、6、12、48 h）后，采用CCK-8检测细胞增殖抑制率，Annexin-V/PI双染检测凋亡，Western blot检测两种自噬途径蛋白Beclin-1、Hsc70、Lamp-2表达，评估巨自噬抑制前后氧化应激下HUVECs的增殖、凋亡及两种自噬的时间调控特点。结果 OX-LDL诱导氧化应激下ROS浓度呈递增关系，选择50μg/mL为适宜浓度进行后续实验。与空白对照组比较，氧化应激组HUVECs Caspase-3、Beclin-1、Hsc70、Lamp-2上调，PCNA下调（P＜0.05）,同时随处理时间延长，48 h内细胞增殖抑制率、全期凋亡率及Lamp-2递增，Hsc70在6 h后递增，12 h内Beclin-1水平递增（P＜0.05）;与氧化应激组比较，抑制巨自噬-氧化应激组Caspase-3、Hsc70、Lamp-2上调，PCNA下调（P＜0.05）,随处理时间延长，同时段Hsc70、Lamp-2上调，且Hsc70在3 h后递增（P＜0.05）。结论 巨自噬和分子伴侣介导自噬在内皮细胞氧化应激过程中先后激活，巨自噬抑制后提高分子伴侣介导自噬水平，并提前激活时间，减轻氧化应激对内皮细胞的损伤。
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