【摘 要】
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目的:探究巨自噬和分子伴侣介导自噬两种自噬途径在人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤中特点。方法:通过不同浓度（0、20、50、100、200μg/m L）氧化性低密度脂蛋白（OX-LDL）作用人脐静脉内皮细胞（HUVECs）后产生的活性氧（ROS）水平筛选诱导HUVECs氧化应激的适宜浓度。设立空白对照组（不做任何处理）、单纯抑制巨自噬组（10 mmol/L 3-MA）、氧化应激组（50μg/m L O
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目的:探究巨自噬和分子伴侣介导自噬两种自噬途径在人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤中特点。方法:通过不同浓度（0、20、50、100、200μg/m L）氧化性低密度脂蛋白（OX-LDL）作用人脐静脉内皮细胞（HUVECs）后产生的活性氧（ROS）水平筛选诱导HUVECs氧化应激的适宜浓度。设立空白对照组（不做任何处理）、单纯抑制巨自噬组（10 mmol/L 3-MA）、氧化应激组（50μg/m L OX-LDL）和抑制巨自噬-氧化应激组（10 mmol/L3-MA+50μg/m L OX-LDL）,检测各组细胞增殖标志蛋白PCNA、凋亡标志蛋白Caspase-3、巨自噬标志蛋白Beclin-1、分子伴侣介导自噬两种标志蛋白Hsc70和Lamp-2蛋白表达水平评估不同处理下HUVECs增殖、凋亡及两种自噬的变化。其中氧化应激组和抑制巨自噬-氧化应激组处理不同时间（1、3、6、12、48 h）后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率、Annexin-V/PI双染检测凋亡及Western blot检测两种自噬途径蛋白Beclin-1、Hsc70、Lamp-2评估巨自噬抑制前后氧化应激下HUVECs的增殖凋亡及两种自噬的时间调控特点。结果:OX-LDL诱导氧化应激下ROS浓度呈递增关系,选择50μg/m L为适宜浓度进行后续实验。与空白对照组比较,氧化应激组HUVECs Caspase-3、Beclin-1、Hsc70、Lamp-2上调,PCNA下调（P＜0.05）,同时随处理时间延长,48 h内细胞增殖抑制率、全期凋亡率及Lamp-2递增,Hsc70在6 h后递增,12 h内Beclin-1水平递增（P＜0.05）;与氧化应激组比较,抑制巨自噬-氧化应激组Caspase-3、Hsc70、Lamp-2上调,PCNA下调（P＜0.05）,随处理时间延长,同时段Hsc70、Lamp-2上调,且Hsc70在3 h后递增（P＜0.05）。结论:巨自噬和分子伴侣介导自噬在内皮细胞氧化应激过程中先后激活,巨自噬抑制后提高分子伴侣介导自噬,并提前激活时间减轻氧化应激对内皮细胞的损伤。
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