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摘要：本文对大枣多糖固体在室温4℃和-18℃下储藏稳定性进行了研究，通过选取不同天数测定大枣多糖抗氧化活性（羟基自由基、DPPH自由基、ABTS自由基清除率以及还原力）的变化，考察了大枣多糖的储藏稳定性。结果表明：在室温条件下储藏，大枣多糖的抗氧化活性有所下降，而在4℃和-18℃储藏条件下，大枣多糖的抗氧化活性变化不大。因此，低温储藏有利于大枣多糖活性的保持。
关键词：大枣多糖；储藏；稳定性；抗氧化活性
中图分类号：R28271文獻标识码：A
1前言
大枣（Zizyphus Jujuba Mill.）又名红枣，为鼠李科的成熟果实，富含蛋白质、糖类、脂肪、环磷酸腺苷、B族维生素、维生素C、以及钙、磷、铁等营养成分[1-4]。大枣具有补中益气、养血安神的功效，是保健佳品。
我国的土壤和气候很适合枣树的生长，枣产区分布极为广阔，主要分布在新疆、河北、山东、河南、山西、陕西等省。大枣及深加工产品具有巨大的发展空间和经济效益。
大枣多糖是大枣中的重要的保健成分，研究表明，它具有保护肝损伤[5]、提高免疫力[6]、抗氧化活性[7，8]等生理功能。将大枣多糖从大枣中提取出来做成含片、胶囊、饮品等保健食品和药品具有广阔的市场，这就涉及到大枣多糖活性保持的问题。本文以大枣多糖的抗氧化活性为衡量指标，研究了大枣多糖固体分别在室温、4℃和-18℃的储藏稳定性。
2材料与方法
21材料与设备
新疆若羌枣购于农贸市场。DPPH和ABTS购于美国Sigma公司。
S-3C酸度计：上海精密科学仪器有限公司；RE-52A旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；TD5A-WS/TD5B-WS台式离心机：湘麓离心机仪器有限公司；752型可见分光光度计：上海菁华科技仪器有限公司。
22试验方法
221大枣多糖提取
大枣去皮去核后于40 ℃烘箱中干燥。称取干燥后的枣肉研磨，用石油醚脱脂，除去石油醚后的样品用95%乙醇洗涤2次，以除去一些色素、单糖、低聚糖和其它一些小分子物质。抽滤除去溶剂后，干燥得到脱脂后大枣样品。
称取脱脂后的大枣粉50g，加入100mL蒸馏水，于温度60℃提取3h。提取结束后，将提取液离心15min（4000r/min），上清液浓缩后，加入5倍体积95%乙醇沉淀多糖，然后放于4℃冰箱静置。12h后抽滤，得到的沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤，洗涤后的沉淀于40℃下干燥，得到大枣粗多糖。
222清除羟基自由基
试管中依次加入2mL 18×10-3mol/L FeSO4、15mL 18×10-3mol/L水杨酸，1mL 3mg/mL大枣多糖溶液，加入1mL 03% H2O2启动反应。37℃水浴反应30min后，在510nm下测其吸光度A样品。对照组用1mL蒸馏水代替大枣多糖溶液，测其吸光度A对照。
自由基的清除率计算公式为：清除率（%）=（1-A样品/A对照）×100
223清除DPPH自由基
将2mL 3mg/mL大枣多糖溶液和2mL 30μg/mL DPPH的乙醇溶液加入试管中，将试管置于黑暗处，反应30min后，在517nm测其吸光值A样品。对照组用2mL蒸馏水代替多糖溶液，测其吸光度A对照。
DPPH自由基清除率计算公式为：清除率（%）=（1-A样品/A对照）×100
224清除ABTS自由基
将20mL 2mg/mL ABTS和02mL 014mol/L过硫酸钾混合，混合后溶液在室温避光条件下静置14h，配置成ABTS自由基储备液。实验前用无水乙醇稀释至吸光度为0700左右。
试管中加入100μL 3mg/mL大枣多糖溶液和5mL ABTS溶液，充分混合，室温避光反应6min，在734nm下测其吸光度A样品；对照组以100μL蒸馏水代替大枣多糖溶液，测吸光度A对照。
ABTS自由基清除率计算公式为：清除率（%）=（1-A样品/A对照）×100
225还原力测定
试管中依次加入05mL大枣多糖溶液、25mL 磷酸缓冲液（02mol/L，pH=66）和25mL 1% K3Fe（CN）6溶液，于50℃水浴中反应20min后迅速冷却。向其中加入25mL 10%的TCA溶液。混匀后移取25mL，向其中加入25mL蒸馏水和05mL 01% FeCl3溶液，混合均匀，10min后，测定700nm下的吸光值A样品。对照组用05mL蒸馏水代替多糖溶液，测其吸光度A对照。
还原力计算公式为：还原力=A样品-A对照
3结果与讨论
31大枣多糖羟基自由基清除率的储藏稳定性
大枣多糖储藏过程中对羟基自由基清除率的影响如图1所示。从图中可以看出，随着时间的延长，大枣多糖的羟基自由基清除能力逐渐下降，在室温时比较明显，而在4℃和-18℃条件下储藏的羟基自由基清除率下降缓慢。
32大枣多糖DPPH自由基清除率的储藏稳定性
图2是大枣多糖DPPH自由基清除率随储藏时间的变化。从图2可以看出，在前30d的储藏过程中，在室温、4℃和-18℃储藏的大枣多糖的清除DPPH自由基能力基本不变，30d之后，由于测量时间间距的拉大，室温下储藏的大枣多糖清除DPPH自由基能力下降明显，而在4℃和-18℃储藏的大枣多糖的清除DPPH自由基能力变化不大。
33大枣多糖ABTS自由基清除率的储藏稳定性
从图3可以看出，在前30d的储藏过程中，在室温下储藏的大枣多糖的ABTS自由基清除率已明显下降，而在4℃和-18℃储藏的大枣多糖的清除ABTS自由基能力在半年里变化都不大。 图3大枣多糖储藏过程ABTS自由基清除率的变化
34大枣多糖还原力的储藏稳定性
大枣多糖储存过程中对其还原力进行了测定，结果如图4所示。从图中可以看出，室温下，大枣多糖的还原力随着时间急剧下降，而在4℃和-18℃条件下储藏的还原力下降较少。
图4大枣多糖储藏过程还原力的变化
4结论
本文研究了不同温度（室温、4℃和-18℃）储藏条件下，大枣多糖在半年内的抗氧化活性的变化。结果表明，储藏条件对大枣多糖的活性有一定的影响，在这3个温度储藏，大枣多糖的抗氧化活性随着时间的延长均呈现降低趋势，但在4℃和-18℃下储藏，大枣多糖的抗氧化活性变化很小，所以低温有利于大枣多糖活性的保持。
参考文献
[1]王蓉珍，赵子青，林勤保，等.大枣功效成分检测的研究进展[J].食品工业科技，2012，33（04）：423-426.
[2]张采，李佳，张永清.大枣化学成分研究概况[J].中國现代中药，2011，13（11）：49-51.
[3]郜文，丁兆毅，徐菲，等.HPLC法测定大枣环磷酸腺苷（c-AMP）的含量[J].首都医科大学学报，2011，32（03）：375-378.
[4]陈鑫，刘永刚，王耀欣，等.HPLC法同时测定大枣中芦丁和酸枣仁皂苷B的含量[J].中国药房，2010，21（03）：247-248.[5]苗明三，苗艳艳，魏荣锐.大枣多糖对CCl4所致大、小鼠肝损伤模型的保护作用[J].中华中医药杂志，2011，26（09）：1997-2000.
[6]刘丹丹，郑丰渠，苗明三.大枣多糖对氢化可的松致小鼠免疫抑制模型免疫功能的影响[J].中医学报，2011，26（07）：809-810.
[7]吴娜，杨洁，许海燕，等.若羌大枣多糖的分离纯化及抗氧化活性的研究[J].天然产物研究与开发，2009，21：319-323，345.
[8]李玲，陈常秀.大枣多糖的分离及抗氧化性研究[J].食品研究与开发，2009，30（09）：49-51，64.
作者简介：孟祥哲（1982-），女，毕业于吉林大学化学学院，硕士研究生，工程师，主要从事水环境监测、分析、评价工作。
关键词：大枣多糖；储藏；稳定性；抗氧化活性
中图分类号：R28271文獻标识码：A
1前言
大枣（Zizyphus Jujuba Mill.）又名红枣，为鼠李科的成熟果实，富含蛋白质、糖类、脂肪、环磷酸腺苷、B族维生素、维生素C、以及钙、磷、铁等营养成分[1-4]。大枣具有补中益气、养血安神的功效，是保健佳品。
我国的土壤和气候很适合枣树的生长，枣产区分布极为广阔，主要分布在新疆、河北、山东、河南、山西、陕西等省。大枣及深加工产品具有巨大的发展空间和经济效益。
大枣多糖是大枣中的重要的保健成分，研究表明，它具有保护肝损伤[5]、提高免疫力[6]、抗氧化活性[7，8]等生理功能。将大枣多糖从大枣中提取出来做成含片、胶囊、饮品等保健食品和药品具有广阔的市场，这就涉及到大枣多糖活性保持的问题。本文以大枣多糖的抗氧化活性为衡量指标，研究了大枣多糖固体分别在室温、4℃和-18℃的储藏稳定性。
2材料与方法
21材料与设备
新疆若羌枣购于农贸市场。DPPH和ABTS购于美国Sigma公司。
S-3C酸度计：上海精密科学仪器有限公司；RE-52A旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；TD5A-WS/TD5B-WS台式离心机：湘麓离心机仪器有限公司；752型可见分光光度计：上海菁华科技仪器有限公司。
22试验方法
221大枣多糖提取
大枣去皮去核后于40 ℃烘箱中干燥。称取干燥后的枣肉研磨，用石油醚脱脂，除去石油醚后的样品用95%乙醇洗涤2次，以除去一些色素、单糖、低聚糖和其它一些小分子物质。抽滤除去溶剂后，干燥得到脱脂后大枣样品。
称取脱脂后的大枣粉50g，加入100mL蒸馏水，于温度60℃提取3h。提取结束后，将提取液离心15min（4000r/min），上清液浓缩后，加入5倍体积95%乙醇沉淀多糖，然后放于4℃冰箱静置。12h后抽滤，得到的沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤，洗涤后的沉淀于40℃下干燥，得到大枣粗多糖。
222清除羟基自由基
试管中依次加入2mL 18×10-3mol/L FeSO4、15mL 18×10-3mol/L水杨酸，1mL 3mg/mL大枣多糖溶液，加入1mL 03% H2O2启动反应。37℃水浴反应30min后，在510nm下测其吸光度A样品。对照组用1mL蒸馏水代替大枣多糖溶液，测其吸光度A对照。
自由基的清除率计算公式为：清除率（%）=（1-A样品/A对照）×100
223清除DPPH自由基
将2mL 3mg/mL大枣多糖溶液和2mL 30μg/mL DPPH的乙醇溶液加入试管中，将试管置于黑暗处，反应30min后，在517nm测其吸光值A样品。对照组用2mL蒸馏水代替多糖溶液，测其吸光度A对照。
DPPH自由基清除率计算公式为：清除率（%）=（1-A样品/A对照）×100
224清除ABTS自由基
将20mL 2mg/mL ABTS和02mL 014mol/L过硫酸钾混合，混合后溶液在室温避光条件下静置14h，配置成ABTS自由基储备液。实验前用无水乙醇稀释至吸光度为0700左右。
试管中加入100μL 3mg/mL大枣多糖溶液和5mL ABTS溶液，充分混合，室温避光反应6min，在734nm下测其吸光度A样品；对照组以100μL蒸馏水代替大枣多糖溶液，测吸光度A对照。
ABTS自由基清除率计算公式为：清除率（%）=（1-A样品/A对照）×100
225还原力测定
试管中依次加入05mL大枣多糖溶液、25mL 磷酸缓冲液（02mol/L，pH=66）和25mL 1% K3Fe（CN）6溶液，于50℃水浴中反应20min后迅速冷却。向其中加入25mL 10%的TCA溶液。混匀后移取25mL，向其中加入25mL蒸馏水和05mL 01% FeCl3溶液，混合均匀，10min后，测定700nm下的吸光值A样品。对照组用05mL蒸馏水代替多糖溶液，测其吸光度A对照。
还原力计算公式为：还原力=A样品-A对照
3结果与讨论
31大枣多糖羟基自由基清除率的储藏稳定性
大枣多糖储藏过程中对羟基自由基清除率的影响如图1所示。从图中可以看出，随着时间的延长，大枣多糖的羟基自由基清除能力逐渐下降，在室温时比较明显，而在4℃和-18℃条件下储藏的羟基自由基清除率下降缓慢。
32大枣多糖DPPH自由基清除率的储藏稳定性
图2是大枣多糖DPPH自由基清除率随储藏时间的变化。从图2可以看出，在前30d的储藏过程中，在室温、4℃和-18℃储藏的大枣多糖的清除DPPH自由基能力基本不变，30d之后，由于测量时间间距的拉大，室温下储藏的大枣多糖清除DPPH自由基能力下降明显，而在4℃和-18℃储藏的大枣多糖的清除DPPH自由基能力变化不大。
33大枣多糖ABTS自由基清除率的储藏稳定性
从图3可以看出，在前30d的储藏过程中，在室温下储藏的大枣多糖的ABTS自由基清除率已明显下降，而在4℃和-18℃储藏的大枣多糖的清除ABTS自由基能力在半年里变化都不大。 图3大枣多糖储藏过程ABTS自由基清除率的变化
34大枣多糖还原力的储藏稳定性
大枣多糖储存过程中对其还原力进行了测定，结果如图4所示。从图中可以看出，室温下，大枣多糖的还原力随着时间急剧下降，而在4℃和-18℃条件下储藏的还原力下降较少。
图4大枣多糖储藏过程还原力的变化
4结论
本文研究了不同温度（室温、4℃和-18℃）储藏条件下，大枣多糖在半年内的抗氧化活性的变化。结果表明，储藏条件对大枣多糖的活性有一定的影响，在这3个温度储藏，大枣多糖的抗氧化活性随着时间的延长均呈现降低趋势，但在4℃和-18℃下储藏，大枣多糖的抗氧化活性变化很小，所以低温有利于大枣多糖活性的保持。
参考文献
[1]王蓉珍，赵子青，林勤保，等.大枣功效成分检测的研究进展[J].食品工业科技，2012，33（04）：423-426.
[2]张采，李佳，张永清.大枣化学成分研究概况[J].中國现代中药，2011，13（11）：49-51.
[3]郜文，丁兆毅，徐菲，等.HPLC法测定大枣环磷酸腺苷（c-AMP）的含量[J].首都医科大学学报，2011，32（03）：375-378.
[4]陈鑫，刘永刚，王耀欣，等.HPLC法同时测定大枣中芦丁和酸枣仁皂苷B的含量[J].中国药房，2010，21（03）：247-248.[5]苗明三，苗艳艳，魏荣锐.大枣多糖对CCl4所致大、小鼠肝损伤模型的保护作用[J].中华中医药杂志，2011，26（09）：1997-2000.
[6]刘丹丹，郑丰渠，苗明三.大枣多糖对氢化可的松致小鼠免疫抑制模型免疫功能的影响[J].中医学报，2011，26（07）：809-810.
[7]吴娜，杨洁，许海燕，等.若羌大枣多糖的分离纯化及抗氧化活性的研究[J].天然产物研究与开发，2009，21：319-323，345.
[8]李玲，陈常秀.大枣多糖的分离及抗氧化性研究[J].食品研究与开发，2009，30（09）：49-51，64.
作者简介：孟祥哲（1982-），女，毕业于吉林大学化学学院，硕士研究生，工程师，主要从事水环境监测、分析、评价工作。