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摘要：目的研究补肾温肺合剂的抗过敏作用。方法采用抗血清致大鼠同种被动皮肤过敏及颅骨肥大细胞脱颗粒试验，测量蓝斑光密度并计算蓝斑抑制百分率，观察肥大细胞脱颗粒情况并计算肥大细胞脱颗粒率和抑制率。结果与阴性对照组比较，补肾温肺合剂的高、中、低三个剂量组均能显著降低皮肤蓝斑的吸光度、显著抑制大鼠颅骨骨膜的肥大细胞脱颗粒，但随着剂量的加大蓝斑吸光度及肥大细胞脱颗粒率均有增加的趋势。结论补肾温肺合剂具有抗过敏作用，且临床等效剂量显示的抗过敏作用最显著。
关键词：补肾温肺合剂；抗过敏；被动皮肤过敏；肥大细胞脱颗粒
中图分类号：R285文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）08-0062-02
补肾温肺合剂是株洲市中医院自制制剂，处方由淫羊藿、细辛、黄芪、防风、五味子、白术、山茱萸、大枣等9味药组成，具有益气固表、补肾温肺、健脾、通利鼻窍等功效，临床主要用于肺肾阳虚型鼻鼽的治疗。鼻鼽常见鼻痒、鼻塞、流涕、喷嚏等症状，相当于西医临床的过敏性鼻炎，本文对该制剂的抗过敏作用进行了实验研究，现报道如下。
1材料
1.1药物补肾温肺合剂，由湖南省株洲市中医医院提供，批号120502，100 mL每瓶；氯雷他定片，河南天方药业股份有限公司，批号120311640，10mg×6片。
1.2试剂卵白蛋白，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS9006-59-1；伊文思蓝，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS314-13-6；中性红，上海朝瑞生物科技有限公司；百白破联合疫苗，武汉生物制品研究所有限责任公司，20110624-4。
1.3动物SD大鼠，SPF级，体质量180～200 g，雌雄兼用，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号SCXK（湘）2011-0003，合格证4304700494。
1.4仪器uv756CRT紫外可见分光光度计，上海佑科仪器仪表有限公司；H-1650台式高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；三目生物显微镜，Motic BA300，武汉麦克奥迪仪器仪表有限公司生产。
2方法
2.1对大鼠同种被动皮肤过敏反应的影响抗血清的制备：雄性 SD大鼠，4只，体重200 g。脚掌皮下注射浓度为 1% 的卵白蛋白生理盐水0.1 mL，隔日1次，共致敏注射3次，皮下注射同时，每只腹腔注射百白破疫苗（2×1010个）[1]。末次致敏后10日于腹主动脉采血，置有盖试管中，于冰箱过夜，离心（3000 r.min-1，10 min）分离血清，-4℃冰箱保存备用。
50只SD大鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，分别为补肾温肺合剂高、中、低剂量组，阳性药物（氯雷他定）组，阴性（模型）对照组，灌胃给药，灌胃体积1 mL/100 g，补肾温肺合剂药物组分别以相应剂量给药，高、中、低剂量分别为28 g/kg，14 g/kg，7 g/kg，低剂量为临床等效剂量，氯雷他定以饮用水制成临床等效剂量的混悬液作为阳性药物，用前摇匀，模型组以饮用水灌胃。连续灌胃3 d，第1 d灌胃后，动物背部去毛，在背中线2侧各取2点，以1：10的上述抗血清稀释液皮内注射，每点0.1 mL，各点间隔距为1.5～2.0 cm，第3 d末次灌胃后30 min，将致敏动物通过尾静脉注射1%的伊文思蓝与 2 %卵白蛋白的生理盐水混合液进行抗原攻击，攻击后30 min断头处死，剪取蓝斑皮肤，剪碎，置于预备好的含丙酮生理盐水（7：3）液5mL的带塞离心管中，充分摇匀，浸泡48 h，8500 r.min-1离心10 min，取上清液，在610 nm波长下测定光密度（OD）。按照文献方法计算蓝斑抑制百分率[2]
2.2对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒的影响抗血清的制备、动物分组及给药同“2.1”，各组动物以相应药物连续灌胃3 d，末次给药后30 min，在各动物头部皮下注射1：20的抗血清0.1 mL，24 h后进行抗原攻击，攻击后30 min处死动物，剪去颅顶皮肤，剪下颅盖骨，立即浸泡于无水乙醇中，1h后移至甲醇溶液中过夜，用0.24%的中性红无水乙醇溶液染色30 min，自来水冲洗后细心剥离骨膜，小心平铺于载玻片上，封片，高倍镜检。选择肥大细胞密度较高的区域，记录100个肥大细胞中脱颗粒肥大细胞数，按照文献法计算肥大细胞脱颗粒百分率及抑制率[3]。
2.3统计方法SPSS11.5统计软件，组间用t检验，结果用（x±s）表示。
3结果
3.1对大鼠同种被动皮肤过敏反应的影响与阴性对照组比较，补肾温肺合剂高、中、低三个剂量组的光密度及氯雷他定组均有显著性差异，且补肾温肺合剂随着剂量的增加其光密度有增大的趋势。
4讨论
过敏性鼻炎属于由IgE抗体介导的Ⅰ型变态反应性疾病，其发病机理是由于过敏原进入机体后，机体产生IgE抗体，抗体与肥大细胞结合，处于致敏状态，当相应的过敏原再次进入机体，与致敏的肥大细胞结合，引起肥大细胞脱颗粒，释放过敏化学介质，使局部血管通透性增加。本文通过大鼠局部血管对伊文思蓝的通透性、及引起颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒率考察药物的抗过敏作用，实验结果表明补肾温肺合剂各剂量组均能减小肥大细胞脱颗粒率、减轻过敏动物血管通透性，减少伊文思蓝染料的渗出，具有良好的抗过敏作用，但是就本文中的3个剂量而言，补肾温肺合剂表现出了药效与剂量之间的负相关关系，以低剂量的抗过敏作用最佳，并与阳性药物氯雷他定作用相比无差异。补肾温肺合剂现临床使用每天3次，每次20mL，本文中低剂量即为临床等效剂量，因此临床使用该制剂无需以加大用量以求得更好疗效，至于其抗过敏作用与剂量之间的负相关关系的原因还有待于进一步研究。
参考文献：
[1]曾宪斌，冯林.消风散颗粒对肥大细胞脱颗粒的抑制作用[J].江西中医学院学报，2008，20（1）：70-71.
[2]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，2006：747.
[3]李儀奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，2006：747-748.
（收稿日期：2014-05-07）
关键词：补肾温肺合剂；抗过敏；被动皮肤过敏；肥大细胞脱颗粒
中图分类号：R285文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）08-0062-02
补肾温肺合剂是株洲市中医院自制制剂，处方由淫羊藿、细辛、黄芪、防风、五味子、白术、山茱萸、大枣等9味药组成，具有益气固表、补肾温肺、健脾、通利鼻窍等功效，临床主要用于肺肾阳虚型鼻鼽的治疗。鼻鼽常见鼻痒、鼻塞、流涕、喷嚏等症状，相当于西医临床的过敏性鼻炎，本文对该制剂的抗过敏作用进行了实验研究，现报道如下。
1材料
1.1药物补肾温肺合剂，由湖南省株洲市中医医院提供，批号120502，100 mL每瓶；氯雷他定片，河南天方药业股份有限公司，批号120311640，10mg×6片。
1.2试剂卵白蛋白，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS9006-59-1；伊文思蓝，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS314-13-6；中性红，上海朝瑞生物科技有限公司；百白破联合疫苗，武汉生物制品研究所有限责任公司，20110624-4。
1.3动物SD大鼠，SPF级，体质量180～200 g，雌雄兼用，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号SCXK（湘）2011-0003，合格证4304700494。
1.4仪器uv756CRT紫外可见分光光度计，上海佑科仪器仪表有限公司；H-1650台式高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；三目生物显微镜，Motic BA300，武汉麦克奥迪仪器仪表有限公司生产。
2方法
2.1对大鼠同种被动皮肤过敏反应的影响抗血清的制备：雄性 SD大鼠，4只，体重200 g。脚掌皮下注射浓度为 1% 的卵白蛋白生理盐水0.1 mL，隔日1次，共致敏注射3次，皮下注射同时，每只腹腔注射百白破疫苗（2×1010个）[1]。末次致敏后10日于腹主动脉采血，置有盖试管中，于冰箱过夜，离心（3000 r.min-1，10 min）分离血清，-4℃冰箱保存备用。
50只SD大鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，分别为补肾温肺合剂高、中、低剂量组，阳性药物（氯雷他定）组，阴性（模型）对照组，灌胃给药，灌胃体积1 mL/100 g，补肾温肺合剂药物组分别以相应剂量给药，高、中、低剂量分别为28 g/kg，14 g/kg，7 g/kg，低剂量为临床等效剂量，氯雷他定以饮用水制成临床等效剂量的混悬液作为阳性药物，用前摇匀，模型组以饮用水灌胃。连续灌胃3 d，第1 d灌胃后，动物背部去毛，在背中线2侧各取2点，以1：10的上述抗血清稀释液皮内注射，每点0.1 mL，各点间隔距为1.5～2.0 cm，第3 d末次灌胃后30 min，将致敏动物通过尾静脉注射1%的伊文思蓝与 2 %卵白蛋白的生理盐水混合液进行抗原攻击，攻击后30 min断头处死，剪取蓝斑皮肤，剪碎，置于预备好的含丙酮生理盐水（7：3）液5mL的带塞离心管中，充分摇匀，浸泡48 h，8500 r.min-1离心10 min，取上清液，在610 nm波长下测定光密度（OD）。按照文献方法计算蓝斑抑制百分率[2]
2.2对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒的影响抗血清的制备、动物分组及给药同“2.1”，各组动物以相应药物连续灌胃3 d，末次给药后30 min，在各动物头部皮下注射1：20的抗血清0.1 mL，24 h后进行抗原攻击，攻击后30 min处死动物，剪去颅顶皮肤，剪下颅盖骨，立即浸泡于无水乙醇中，1h后移至甲醇溶液中过夜，用0.24%的中性红无水乙醇溶液染色30 min，自来水冲洗后细心剥离骨膜，小心平铺于载玻片上，封片，高倍镜检。选择肥大细胞密度较高的区域，记录100个肥大细胞中脱颗粒肥大细胞数，按照文献法计算肥大细胞脱颗粒百分率及抑制率[3]。
2.3统计方法SPSS11.5统计软件，组间用t检验，结果用（x±s）表示。
3结果
3.1对大鼠同种被动皮肤过敏反应的影响与阴性对照组比较，补肾温肺合剂高、中、低三个剂量组的光密度及氯雷他定组均有显著性差异，且补肾温肺合剂随着剂量的增加其光密度有增大的趋势。
4讨论
过敏性鼻炎属于由IgE抗体介导的Ⅰ型变态反应性疾病，其发病机理是由于过敏原进入机体后，机体产生IgE抗体，抗体与肥大细胞结合，处于致敏状态，当相应的过敏原再次进入机体，与致敏的肥大细胞结合，引起肥大细胞脱颗粒，释放过敏化学介质，使局部血管通透性增加。本文通过大鼠局部血管对伊文思蓝的通透性、及引起颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒率考察药物的抗过敏作用，实验结果表明补肾温肺合剂各剂量组均能减小肥大细胞脱颗粒率、减轻过敏动物血管通透性，减少伊文思蓝染料的渗出，具有良好的抗过敏作用，但是就本文中的3个剂量而言，补肾温肺合剂表现出了药效与剂量之间的负相关关系，以低剂量的抗过敏作用最佳，并与阳性药物氯雷他定作用相比无差异。补肾温肺合剂现临床使用每天3次，每次20mL，本文中低剂量即为临床等效剂量，因此临床使用该制剂无需以加大用量以求得更好疗效，至于其抗过敏作用与剂量之间的负相关关系的原因还有待于进一步研究。
参考文献：
[1]曾宪斌，冯林.消风散颗粒对肥大细胞脱颗粒的抑制作用[J].江西中医学院学报，2008，20（1）：70-71.
[2]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，2006：747.
[3]李儀奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，2006：747-748.
（收稿日期：2014-05-07）