【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5（LncRNA GAS5）对糖尿病心肌病（DCM）大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 通过高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射构建大鼠DCM模型，分为假手术（Sham）组和DCM组。苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织的病理变化；Masson染色检测大鼠心肌纤维化程度；实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测心肌组织LncRNA GAS
【基金项目】
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浙江省医药卫生科技计划项目（2020KY205）； 浙江省中医药科技计划项目（2022ZA082）； 浙江中医药大学中青年科研创新基金项目（KC201938）；
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目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5（LncRNA GAS5）对糖尿病心肌病（DCM）大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 通过高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射构建大鼠DCM模型，分为假手术（Sham）组和DCM组。苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织的病理变化；Masson染色检测大鼠心肌纤维化程度；实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测心肌组织LncRNA GAS5的表达情况。大鼠心肌细胞（H9c2）随机分为对照组、高糖组、高糖+GAS5组、高糖+miR-137 mimics组、高糖+miR-137 mimics+GAS5组、高糖+沉默调节蛋白6（SIRT6）组、高糖+SIRT6+miR-137 mimics组并进行相应处理。qRT-PCR检测LncRNA GAS5、miR-137的表达量；Western blot检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、SIRT6蛋白表达量；流式细胞术检测细胞凋亡情况；细胞计数试剂盒8检测细胞活力；双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GAS5与miR-137、miR-137与SIRT6的靶向作用。结果 HE染色和Masson染色结果显示，与Sham组相比，DCM组心肌细胞肥大，排列紊乱，胶原纤维增多，大量炎性细胞浸润。与Sham组比较，DCM组Lnc RNA GAS5表达降低（P ＜0.01）。与对照组比较，高糖组LncRNA GAS5表达水平随高糖培养时间延长逐渐降低（P ＜0.01）。与高糖组比较，高糖+GAS5组LncRNA GAS5表达量、细胞活力、Bcl-2表达增加（P ＜0.05）;miR-137、细胞凋亡比例、Bax表达降低（P ＜0.05）。与高糖组比较，高糖+miR-137 mimics组miR-137、Bax蛋白表达量、细胞凋亡率增加（P ＜0.05）；细胞活力、SIRT6、Bcl-2蛋白表达量降低（P ＜0.05）。与高糖+miR-137 mimics组相比，高糖+GAS5+miR-137 mimics组细胞活力、Bcl-2表达增加（P ＜0.01）；细胞凋亡比例、Bax表达降低（P ＜0.05）。与高糖组比较，高糖+SIRT6组细胞活力、Bcl-2、SIRT6蛋白表达增加（P ＜0.01）；细胞凋亡比例、Bax表达降低（P ＜0.01）。与高糖+SIRT6组比较，高糖+SIRT6+miR-137 mimics组细胞凋亡率、Bax蛋白表达量升高；细胞活力、Bcl-2蛋白表达量降低（P ＜0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实LncRNA GAS5和miR-137、miR-137和SIRT6存在靶向关系。结论 过表达LncRNA GAS5可通过内源性竞争机制减少miR-137与SIRT6的结合，促进SIRT6表达抑制DCM大鼠心肌细胞凋亡。
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