LncRNA GAS5通过miR-18a-5p/AXIN2/GSK3β轴抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移

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目的:(1)通过qPCR检测lncRNA GAS5和miR-18a-5p在膀胱癌中的表达情况。(2)通过平板克隆实验和EdU实验检测lncRNA GAS5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。(3)通过transwell实验和划痕实验检测lncRNA GAS5和miR-18a-5p对膀胱癌迁移能力的影响。(4)探究lncRNA GAS5与miR-18a-5p之间的调控关系。(5)探究miR-18a-5p调控膀胱癌增殖能力和迁移能力的下游途径。方法:(1)使用EdU实验和平板克隆形成实验检测lncRNA GAS5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。(2)使用Transwell实验和划痕实验检测lncRNA GAS5和miR-18a-5p对膀胱癌迁移能力的影响。(3)qPCR检测lncRNA GAS5和miR-18a-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达情况。(4)使用核质分离实验和荧光原位杂交(FISH)试验,以检测lncRNA GAS5在细胞中的定位。(5)使用Ch Irp,RNA免疫沉淀(RIP)和双荧光素酶试验来确定GAS5与miR-18a-5p的结合以及miR-18a-5p与AXIN2和GSK3β的结合。(6)蛋白印迹技术和免疫组化用于检测蛋白质水平的变化。结果:(1)与正常粘膜组织和正常膀胱上皮细胞相比,lncRNA GAS5在膀胱癌组织和细胞中的表达明显下调,而miR-18a-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达明显上调。(2)核质分离实验和荧光原位杂交(FISH)试验结果显示lncRNA GAS5主要分布在细胞质中,表明lncRNA GAS5的主要是通过ce RNA机制调控膀胱癌的发生发展。(3)过表达lncRNA GAS5后膀胱癌细胞的增殖能力和迁移能力明显受到抑制,而干扰lncRNA GAS5表达后,膀胱癌细胞增殖能力和迁移能力明显增加。表明lncRNA GAS5在膀胱癌中是抑癌基因。(4)通过Ch Irp,RNA免疫沉淀(RIP)和荧光素酶试验表明:lncRNA GAS5可以与miR-18a-5p靶向结合。(5)过表达miR-18a-5p后膀胱癌细胞增殖能力和迁移能力明显增加,而干扰miR-18a-5p表达后膀胱癌细胞的增殖能力和迁移能力明显受到抑制。表明miR-18a-5p在膀胱癌中是促癌基因。(6)荧光素酶实验结果表明,miR-18a-5p可以靶向结合AXIN2和GSK3β。(7)逆转实验结果显示,过表达lncRNA GAS5可以逆转miR-18a-5p过表达引起的膀胱癌细胞增殖、迁移能力和Wnt/β-cantein通路活性增强,也可以逆转miR-18a-5p过表达造成的AXIN2和GSK3β表达降低。(8)裸鼠成瘤实验证明在体内过表达lncRNA GAS5可以逆转miR-18a-5p过表达引起的膀胱癌细胞增殖、迁移能力和Wnt/β-cantein通路活性增强,也可以逆转miR-18a-5p过表达造成的AXIN2和GSK3β表达降低。结论:(1)lncRNA GAS5作为抑癌基因可以抑制膀胱癌增殖迁移。(2)miR-18a-5p作为促癌基因可以促进膀胱癌增殖迁移。(3)lncRNA GAS5可以靶向miR-18a-5p进而调控膀胱癌的增殖能力和迁移能力。(4)miR-18a-5p可以同时与AXIN2和GSK3β靶向结合从而调控Wnt通路的活性,进而调节膀胱癌增殖迁移能力。(5)lncRNA GAS5有望成为膀胱癌的的分子标志物,为治疗膀胱癌提供了一种新的潜在治疗策略。
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