【摘 要】
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为了构建CRISPR/Cas9介导的番茄多基因编辑体系，用SlU6-2p、SlU6-3p、SlU6-7p、SlU3-5p、SlU3-9p和SlU6-5p启动子分别替换pKSE401和pCBC-DT1T2载体中的拟南芥U6启动子，构建了1个双元载体（pMGET）、2个中间载体（pKC-S2M和pKC-S3M）和3个gRNA模块载体（pCBC-S1、pCBC-S2和pCBC-S3）。为了测试该多基因编
【机 构】
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中国农业科学院蔬菜花卉研究所蔬菜生物育种全国重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31872949，31672154）； 国家重点研发计划项目（2018YFD1000800）；
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为了构建CRISPR/Cas9介导的番茄多基因编辑体系，用SlU6-2p、SlU6-3p、SlU6-7p、SlU3-5p、SlU3-9p和SlU6-5p启动子分别替换pKSE401和pCBC-DT1T2载体中的拟南芥U6启动子，构建了1个双元载体（pMGET）、2个中间载体（pKC-S2M和pKC-S3M）和3个gRNA模块载体（pCBC-S1、pCBC-S2和pCBC-S3）。为了测试该多基因编辑体系，通过PCR扩增、Golden gate克隆和同尾酶技术，将含有6个番茄果实性状相关基因Green flesh（GF）、Ovate（O）、Locule number（LC）、SlMYB12（Y）、Tangerine（T）、Uniform ripening（U）靶点序列的sgRNA聚合构建多基因编辑载体pMGET-OYGTULC和pMGET-TULCOYG，检测6个基因同时被编辑的效率分别为44.00%和11.76%。用携带pMGET-OYGTULC载体的根癌农杆菌转化番茄材料获得2株6个基因均被编辑的植株，序列变异为单个碱基的插入、单个或多个碱基的缺失及大片段的缺失等多种形式。本研究中该多基因编辑体系可以高效地应用于番茄多基因编辑，并且可以得到稳定遗传的突变体，可为番茄基础研究和遗传改良提供一个简便的工具箱。
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