【摘 要】
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利用Gateway克隆技术快速构建丝状真菌表达载体,以米曲霉α-淀粉酶A启动子（amyB）、α-糖苷酶终止子（agdA）及黑曲霉酸性蛋白酶基因（pepA）分别构建入门载体,以带有潮霉素抗性标记（hygB
【基金项目】
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国家科技支撑计划（2007BAK36B03）, 广东省科技攻关项目（2008A010900002）
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利用Gateway克隆技术快速构建丝状真菌表达载体,以米曲霉α-淀粉酶A启动子（amyB）、α-糖苷酶终止子（agdA）及黑曲霉酸性蛋白酶基因（pepA）分别构建入门载体,以带有潮霉素抗性标记（hygB）的农杆菌双元载体pHGW为目的载体,通过LR连接反应,构建根癌农杆菌介导丝状真菌重组表达载体pHGW-apA。转化泡盛曲霉宿主菌,筛选的转化子经传代培养确定其遗传稳定性,PCR及测序分析表明,hygB和目的基因pepA整合到了泡盛曲霉基因组。转录水平上的RealTime-PCR定量分析、表达水平上的Wes
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