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摘 要：丹参是典型的唇形科植物，主要有两种有效成分，一种是水溶性成分，也就是总酚酸；另一种是脂溶性成分，也就是醌类化合物。总酚酸的药物功能是抗血栓等，临床上主要是用来治疗心肌缺血、心绞痛等。传统的丹参总酚酸前处理方法通常是利用酸提取，待到提取完成后还会将PH值进行调节，通常调到2左右，整个过程的提取效率都非常低。本文在此基础上进行改进，利用比色法以及高效液相色谱法。希望能够为同仁提供帮助。
关键词：丹參；总酚酸；前处理；方法 传统丹参总酚酸前处理方法不仅浪费时间，而且效率并不高，因为学者一直致力于改进提取方法。此次研究借鉴了传统方法的优势，但是却同时应用另外两种提取方法，一种是比色法，另一种是高效液相色谱法。现将研究结果报告如下。
一、仪器与材料
日本岛津UV2550紫外分光光度计；Waters2695高效液相谱仪，Empower色谱工作站；日本岛津LC10Atvp高效液相色谱仪。原儿茶醛、丹酚酸B、丹参素钠对照品均购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，去离子水。丹参药材产自山东，经笔者鉴定为丹参S.miltiorrhizaBunge的干燥根茎。
二、方法与结果
1、总酚酸的比色法测定：取样品溶液0.2mL于10mL量瓶中，分别加入5%NaNO20.5mL、10%Al（NO3）30.5mL、4%NaOH溶液4mL，用水补足至刻度，立即进行紫外扫描。以缺NaOH溶液的样品溶液作参比，置1cm的吸收池中，在500nm处测定吸光度，以丹酚酸B计，按线性回归方程计算。
2、总酚酸的HPLC法测定
2.1色谱条件：色谱柱为伊利特ODS2；流动相：乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脱（0～15min，5%乙腈；16～30min，25%乙腈）；检测波长281nm；进样量：10μL。
2.2测定：配制适宜质量浓度的各对照品溶液，采用外标两点法分别测定丹酚酸B、原儿茶醛和丹参素（以丹参素钠计）的量，以3种成分的量之和作为总酚酸的量。
3、提取方式的考察
分别用甲醇及水作提取溶剂，回流1h或超声1h，结果见表1。可见甲醇超声时丹参总酚酸在比色法和HPLC法中测得的提取率均最高，且超声方法简单、易行，故采用甲醇超声提取最佳。
4、提取溶剂的考察
用不同体积分数的甲醇提取4份，分别计算总酚酸，确定甲醇的体积分数，结果见表2。可见比色法和HPLC法测得75%甲醇超声时总酚酸的量最高，提取效果最好。
5、提取时间的考察
用75%甲醇超声20、30、40、60min，结果见表3。可见超声30min提取率最高。
由上可知，丹参总酚酸的最佳提取条件：取丹参粉末0.1g，加入75%甲醇溶液100mL超声30min，放冷后，滤过，定容到100mL，即得。
三、讨论
传统的丹参总酚酸测定的前处理方法主要是原儿茶醛看做是对照品，而后运用比色法来进行测定，但丹参中原儿茶醛所占比重并不高，因此将其看作是对照品，难以真正的体现出样品质量。此次研究中将丹酚酸B看作是对照品，此种物质含量比较多，但是并不稳定，完全可以体现出丹参总酚酸的变化。
比色法中存在着很多空白处，这些通常都是加进了显色剂，却没有添加样品的溶液，由于不只一个样品溶液中存在着紫外吸收成分，所以空白也有可能是样品受到了干扰。此次研究在添加上了显色剂NaOH后，溶液出现显示出了颜色，所以研究者将未加入NaOH的溶液看作是空白溶液，这样既能够有效的避免样品干扰，也能够降低显色剂产生的干扰。
此次研究中，提取的溶液PH为酸性，在对丹参总酚酸量进行测量，发现已经由中性阶段的6%，下降到2%，出现此种情况极有可能是因为离子相互作用。丹参总酚酸传统应用的方法就是使用酸提，也可以是待其提取完成后对其PH值进行调整，直到调节到2左右，通常情况下，总酚酸量在2-3%左右，这本次研究中所得到的基本上相同。早期文献中测得丹参中丹酚酸B量通常为5%左右。此次研究中总酚酸量保持在7%左右，高效液相色谱法与比色法两种方法红测得的结果基本上相同，因此使用本文中研究方法更具有可靠性，而且最终所取得的结果也比较可信。
此次实验运用的是甲醇以及水来进行提取，选择的提取方法有两种，一种是超声提取、另一种是回流提取，研究发现运用甲醇来提取丹酚酸B具有非常高的效率，尽管回流也能够对丹参素钠进行提取，而且具有非常高的效率，但是丹酚酸B不稳定不宜用回流，甲醇超声时丹参总酚酸在比色法和HPLC法中测得的提取率均最高，且超声方法简单、易行，综合评价甲醇超声提取最佳。
参考文献：
[1] 王凤美，李磊，柳先平，王小如，黎先春. 丹参药材中丹酚酸B的提取及其HPLC法测定[J]. 现代中药研究与实践. 2004（S1）
[2] 李朝霞，王地. 丹参水溶性成分的研究进展[J]. 北京中医. 2004（03）
[3] 李广胜，王光新，赵牛和. 丹参口服液中总酚酸性成分的含量测定[J]. 时珍国医国药. 2001（08）
[4] 王文祥，周巧霞，蒋木岗，顾振纶. 比色法测定丹参及提取物水溶性总酚的改进[J]. 中草药. 2001（08）
[5] 顾洪安，余琛，王圣立，季申，文英强，朱大元. HPLC法测定丹参中丹酚酸B的含量[J]. 药学服务与研究. 2002（S1）
关键词：丹參；总酚酸；前处理；方法 传统丹参总酚酸前处理方法不仅浪费时间，而且效率并不高，因为学者一直致力于改进提取方法。此次研究借鉴了传统方法的优势，但是却同时应用另外两种提取方法，一种是比色法，另一种是高效液相色谱法。现将研究结果报告如下。
一、仪器与材料
日本岛津UV2550紫外分光光度计；Waters2695高效液相谱仪，Empower色谱工作站；日本岛津LC10Atvp高效液相色谱仪。原儿茶醛、丹酚酸B、丹参素钠对照品均购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，去离子水。丹参药材产自山东，经笔者鉴定为丹参S.miltiorrhizaBunge的干燥根茎。
二、方法与结果
1、总酚酸的比色法测定：取样品溶液0.2mL于10mL量瓶中，分别加入5%NaNO20.5mL、10%Al（NO3）30.5mL、4%NaOH溶液4mL，用水补足至刻度，立即进行紫外扫描。以缺NaOH溶液的样品溶液作参比，置1cm的吸收池中，在500nm处测定吸光度，以丹酚酸B计，按线性回归方程计算。
2、总酚酸的HPLC法测定
2.1色谱条件：色谱柱为伊利特ODS2；流动相：乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脱（0～15min，5%乙腈；16～30min，25%乙腈）；检测波长281nm；进样量：10μL。
2.2测定：配制适宜质量浓度的各对照品溶液，采用外标两点法分别测定丹酚酸B、原儿茶醛和丹参素（以丹参素钠计）的量，以3种成分的量之和作为总酚酸的量。
3、提取方式的考察
分别用甲醇及水作提取溶剂，回流1h或超声1h，结果见表1。可见甲醇超声时丹参总酚酸在比色法和HPLC法中测得的提取率均最高，且超声方法简单、易行，故采用甲醇超声提取最佳。
4、提取溶剂的考察
用不同体积分数的甲醇提取4份，分别计算总酚酸，确定甲醇的体积分数，结果见表2。可见比色法和HPLC法测得75%甲醇超声时总酚酸的量最高，提取效果最好。
5、提取时间的考察
用75%甲醇超声20、30、40、60min，结果见表3。可见超声30min提取率最高。
由上可知，丹参总酚酸的最佳提取条件：取丹参粉末0.1g，加入75%甲醇溶液100mL超声30min，放冷后，滤过，定容到100mL，即得。
三、讨论
传统的丹参总酚酸测定的前处理方法主要是原儿茶醛看做是对照品，而后运用比色法来进行测定，但丹参中原儿茶醛所占比重并不高，因此将其看作是对照品，难以真正的体现出样品质量。此次研究中将丹酚酸B看作是对照品，此种物质含量比较多，但是并不稳定，完全可以体现出丹参总酚酸的变化。
比色法中存在着很多空白处，这些通常都是加进了显色剂，却没有添加样品的溶液，由于不只一个样品溶液中存在着紫外吸收成分，所以空白也有可能是样品受到了干扰。此次研究在添加上了显色剂NaOH后，溶液出现显示出了颜色，所以研究者将未加入NaOH的溶液看作是空白溶液，这样既能够有效的避免样品干扰，也能够降低显色剂产生的干扰。
此次研究中，提取的溶液PH为酸性，在对丹参总酚酸量进行测量，发现已经由中性阶段的6%，下降到2%，出现此种情况极有可能是因为离子相互作用。丹参总酚酸传统应用的方法就是使用酸提，也可以是待其提取完成后对其PH值进行调整，直到调节到2左右，通常情况下，总酚酸量在2-3%左右，这本次研究中所得到的基本上相同。早期文献中测得丹参中丹酚酸B量通常为5%左右。此次研究中总酚酸量保持在7%左右，高效液相色谱法与比色法两种方法红测得的结果基本上相同，因此使用本文中研究方法更具有可靠性，而且最终所取得的结果也比较可信。
此次实验运用的是甲醇以及水来进行提取，选择的提取方法有两种，一种是超声提取、另一种是回流提取，研究发现运用甲醇来提取丹酚酸B具有非常高的效率，尽管回流也能够对丹参素钠进行提取，而且具有非常高的效率，但是丹酚酸B不稳定不宜用回流，甲醇超声时丹参总酚酸在比色法和HPLC法中测得的提取率均最高，且超声方法简单、易行，综合评价甲醇超声提取最佳。
参考文献：
[1] 王凤美，李磊，柳先平，王小如，黎先春. 丹参药材中丹酚酸B的提取及其HPLC法测定[J]. 现代中药研究与实践. 2004（S1）
[2] 李朝霞，王地. 丹参水溶性成分的研究进展[J]. 北京中医. 2004（03）
[3] 李广胜，王光新，赵牛和. 丹参口服液中总酚酸性成分的含量测定[J]. 时珍国医国药. 2001（08）
[4] 王文祥，周巧霞，蒋木岗，顾振纶. 比色法测定丹参及提取物水溶性总酚的改进[J]. 中草药. 2001（08）
[5] 顾洪安，余琛，王圣立，季申，文英强，朱大元. HPLC法测定丹参中丹酚酸B的含量[J]. 药学服务与研究. 2002（S1）