【摘 要】
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目的 建立水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）糖蛋白E（gE）的双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证。方法 以VZV全病毒抗原为免疫原，通过小鼠杂交瘤融合技术筛选可稳定分泌抗VZV-g E抗体的杂交瘤细胞株，间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价，经Hi TrapTMMabselectTMSu Re和Hi TrapTMDesalting纯化后，12%SDS-
【基金项目】
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吉林省科技厅发展计划项目（20200404191YY）；
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目的 建立水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）糖蛋白E（gE）的双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证。方法 以VZV全病毒抗原为免疫原，通过小鼠杂交瘤融合技术筛选可稳定分泌抗VZV-g E抗体的杂交瘤细胞株，间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价，经Hi TrapTMMabselectTMSu Re和Hi TrapTMDesalting纯化后，12%SDS-PAGE分析单克隆抗体纯度，Western blot法检测特异性，小鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定亚型。经表位叠加试验筛选捕获抗体及酶标抗体，棋盘滴定法确定捕获抗体（0.25、0.5、1、2、5和10μg/m L）和酶标抗体（1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶5 000和1∶10 000稀释）工作浓度后，建立VZV-g E含量的双抗体夹心ELISA检测方法。验证方法的线性范围、准确性、精密性和特异性。采用建立的方法检测3批7 L生物反应器培养1～14 d的CHO-VZV-g E细胞培养上清中g E含量。结果共获得4株稳定分泌抗VZV-gE特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株，命名为mAb-B2、mAb-11、K9C7和K9F4，小鼠腹水抗体效价为10~6～10~7，纯化后纯度约为97%，均可与VZV全病毒蛋白发生特异性结合，轻链均为κ链，重链分别为IgG2b、IgG1、IgG2b及Ig G2a。确定mAb-B2作为捕获抗体，HPR标记的mAb-11作为酶标抗体，两者最佳工作浓度分别为1.5μg/mL和1∶5 000稀释。g E抗原内部参考品浓度在1.95～1 000 ng/mL范围内，与A450呈良好的线性关系，四参数方程为：Y=（0.15-3.99）/[1+（X/67.4）1.49]+3.99,R~2为0.999；准确性验证回收率为94.9%～114.0%；精密性验证变异系数（CV）均＜15%；除CHO-VZV-gE细胞培养上清、水痘减毒活疫苗和带状疱疹减毒活疫苗外，其他检测样品的A450均＜0.15，无交叉反应。3批CHO-VZV-gE细胞培养上清中gE含量随培养时间的延长逐渐升高，且在14 d内与培养时间呈正相关（R~2=0.995 6,P=0.000 1）。结论 建立的双抗体夹心ELISA法具有良好的准确性、精密性和特异性，可用于VZV疫苗中g E抗原含量的快速检测。
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