【摘 要】
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运用基因工程手段，构建高效表达单宁酶的黑曲霉重组菌株，并对重组酶活性及酶学性质进行研究，以期提高单宁酶的表达，更好的实现单宁酶在茶饮料、饲料等行业的重要作用。以内源高表达的glaA基因位点为整合靶位点，集成glaA多拷贝强启动子PglaA6R和信号肽SglaA，构建单宁酶基因AnTan黑曲霉重组表达载体pSZHG6R-AnTan，采用农杆菌介导法转化黑曲霉，获得单宁酶黑曲霉纯合重组菌株A1。聚丙烯
【基金项目】
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黑龙江省自然科学基金联合引导项目（LH2019C022）； 中国博士后科学基金（2019M651149）；
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运用基因工程手段，构建高效表达单宁酶的黑曲霉重组菌株，并对重组酶活性及酶学性质进行研究，以期提高单宁酶的表达，更好的实现单宁酶在茶饮料、饲料等行业的重要作用。以内源高表达的glaA基因位点为整合靶位点，集成glaA多拷贝强启动子PglaA6R和信号肽SglaA，构建单宁酶基因AnTan黑曲霉重组表达载体pSZHG6R-AnTan，采用农杆菌介导法转化黑曲霉，获得单宁酶黑曲霉纯合重组菌株A1。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测结果表明，目的蛋白大小约为76 kDa；以10%糊精为碳源摇瓶发酵至11 d时，酶活最高达到134.36 U ·mL-1，约为宿主菌株的192倍。酶学性质研究表明，最适温度为50 ℃，高温时热稳定性较差；最适pH为7.0，碱性耐受能力较强。K+、Mg2+和Ca2+对重组酶没有影响；Zn2+对重组酶有明显的促进作用；Cu2+和Fe2+对重组酶有微弱的抑制作用；Mn2+和EDTA对重组酶有明显的抑制作用。研究结果为进一步优化单宁酶的分泌表达提供了有价值的参考。
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