【摘 要】
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【目的】探究RNA甲基化转移酶样3（methyltransferase-like 3,METTL3）对牛骨骼肌卫星细胞（bovine skeletal muscle satellite cells,BSMSCs）增殖和成肌分化的影响。【方法】利用体外诱导BSMSCs分化模型模拟牛骨骼肌生长发育过程,采用实时荧光定量PCR技术和蛋白质免疫印迹技术（Western blotting）检测METTL3在
【机 构】
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天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室
【基金项目】
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天津市自然科学基金项目（18JCYBJC29700）； 天津市“131”创新型人才培养工程第一层次人选资助项目； 天津市研究生科研创新项目（2021YJSS136）；
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【目的】探究RNA甲基化转移酶样3（methyltransferase-like 3,METTL3）对牛骨骼肌卫星细胞（bovine skeletal muscle satellite cells,BSMSCs）增殖和成肌分化的影响。【方法】利用体外诱导BSMSCs分化模型模拟牛骨骼肌生长发育过程,采用实时荧光定量PCR技术和蛋白质免疫印迹技术（Western blotting）检测METTL3在BSMSCs分化前后mRNA和蛋白表达水平的差异。设计合成METTL3干扰RNA（si-METTL3）,且构建METTL3的过表达载体pcDNA3.1-METTL3,分别转染至BSMSCs中,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测转染效果和BSMSCs增殖标志因子盒转录家族成员7（paired box 7,Pax7）的表达情况,EdU检测细胞增殖情况。将转染si-METTL3和pcDNA3.1-METTL3的BSMSCs进行体外诱导分化,通过光学显微镜观察BSMSCs进入分化期的细胞形态,利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测BSMSCs分化标志因子肌球蛋白重链（myosin heavy chain,MyHC）、肌细胞生成素（myogenin,MyoG）的表达情况。通过比色法检测干扰或过表达METTL3后,BSMSCs不同时期的m~6A RNA甲基化水平。【结果】BSMSCs分化后METTL3蛋白表达水平极显著高于增殖期（P＜0.01）;干扰或过表达METTL3后,Pax7的mRNA水平以及蛋白水平均无显著变化（P＞0.05）,EdU阳性细胞率与对照组相比均无显著差异（P＞0.05）;干扰METTL3后,细胞肌管数量明显增多,肌管直径明显增大,MyHC的mRNA和蛋白表达水平极显著升高（P＜0.01）,MyoG的蛋白表达水平极显著升高（P＜0.01）,并且BSMSCs增殖和分化期的m~6A RNA甲基化水平均极显著下调（P＜0.01）;过表达METTL3后,细胞肌管数量明显减少,肌管直径明显变小,MyHC的mRNA和蛋白表达水平极显著降低（P＜0.01）,MyoG的蛋白表达水平极显著降低（P＜0.01）,并且BSMSCs增殖和分化期的m~6A RNA甲基化水平均极显著上升（P＜0.01）。【结论】METTL3对BSMSCs的增殖过程没有显著影响,但对BSMSCs的成肌分化过程具有调控作用,并影响BSMSCs的m~6A RNA甲基化水平。干扰METTL3可以促进BSMSCs的成肌分化进程,降低BSMSCs的m~6A RNA甲基化水平;而过表达METTL3会抑制BSMSCs的分化,提高BSMSCs的m~6A RNA甲基化水平。试验结果为进一步探明METTL3在牛肌肉发育中的调控机制奠定了基础。
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