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目的构建可回复性永生化逆转录病毒载体，为肝细胞可回复性永生化奠定基础。方法扩增加强型绿色荧光蛋白（EGFP）及胸腺激酶（TK）并采用重叠延伸拼接法（SOE）连接EGFP和TK，将EGFP-TK（融合基因亚克隆至pBABE-puro-lox，构建成新载体pBGTKlox，再将永生化基因SV40T连接至pBGTKlox，构成新载体pBTGTKlox，最后将雌激素受体与重组酶融合基因（Cm-ER）连接至pBTGTKlox，构成新载体pCTGTKlox。将pCTGTKlox和pPDF15质粒共转染包装细胞PT67