【摘 要】
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目的构建针对preS2基因的肝癌特异性反义RNA表达载体,并对其特异性和有效性进行研究. 方法 PCR扩增preS2(3?203～340)基因,克隆至含甲胎蛋白启动子的EB病毒表达载体pEBAF,构建反义RNA表达载体pEBAF-as-preS2.脂质体转染肝癌细胞和ECV304细胞,3?d后Northern blot检测preS2 mRNA的表达,ELISA检测HBV抗原,荧光定量PCR检测HB
【机 构】
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250012,济南,山东大学医学院免疫学研究所,
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目的构建针对preS2基因的肝癌特异性反义RNA表达载体,并对其特异性和有效性进行研究. 方法 PCR扩增preS2(3?203～340)基因,克隆至含甲胎蛋白启动子的EB病毒表达载体pEBAF,构建反义RNA表达载体pEBAF-as-preS2.脂质体转染肝癌细胞和ECV304细胞,3?d后Northern blot检测preS2 mRNA的表达,ELISA检测HBV抗原,荧光定量PCR检测HBV DNA. 结果序列分析表明,pEBAF-as-preS2构建成功,Northern blot证实反义RNA仅在AFP阳性的肝癌细胞中表达,pEBAF-as-preS2转染3?d后,可显著抑制HepG2.2.15细胞HBV复制和抗原表达,对HBsAg、HBeAg表达的抑制率分别为33.4%和41.5%;对HBV复制抑制率为86%. 结论反义RNA表达载体pEBAF-as-preS2仅在肝癌细胞中特异表达、并可有效抑制HBV,有良好的开发应用前景.
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