【摘 要】
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目的 研究非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)基因对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年8月,将非小细胞肺癌A549、H1299细胞株分为三组:空白对照组(未经转染的细胞);阴性对照组[转染非特异性的小干扰RNA(siRNA)的细胞];siRNA-TPX2组(转染TPX2特异性的siRNA的细胞).采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)方法对转染小干扰RNA(siRNA)前后的非小细胞肺癌A549、
【机 构】
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南通大学附属肿瘤医院胸外科,江苏 南通226300
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目的 研究非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)基因对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年8月,将非小细胞肺癌A549、H1299细胞株分为三组:空白对照组(未经转染的细胞);阴性对照组[转染非特异性的小干扰RNA(siRNA)的细胞];siRNA-TPX2组(转染TPX2特异性的siRNA的细胞).采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)方法对转染小干扰RNA(siRNA)前后的非小细胞肺癌A549、H1299细胞株进行鉴定.人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力.Tanswell小室迁移实验检测细胞迁移和侵袭的影响.蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路关键分子及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的变化.结果 siRNA-TPX2组中TPX2 mRNA和蛋白的相对表达水平显著低于阴性对照组及空白对照组(P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制A549细胞的增殖[24 h(0.71±0.02)比(0.62±0.03);48 h(1.62±0.03)比(0.69±0.02);72 h(2.08±0.03)比(0.95±0.02)]、迁移[(91.18±13.97)个比(49.95±12.15)个]、侵袭[(165.46±19.19)个比(93.37±13.54)个](P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制H1299细胞的增殖[24 h(0.81±0.03)比(0.65±0.02);48 h(1.73±0.02)比(0.78±0.01);72 h(2.18±0.03)比(1.16±0.02)]、迁移[(74.31±13.86)个比(38.76±9.05)个]、侵袭[(158.46±19.58)个比(88.47±11.23)个](P<0.05).TPX2表达下调能显著降低非小细胞肺癌A549、H1299细胞中PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶12(MMP12)蛋白的表达(P<0.05).激动剂胰岛素生长样因子1(IGF-1)能完全削弱TPX2-siRNA抑制A549、H1299细胞中PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达(P<0.05).结论 TPX2通过调控PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达促进非小细胞肺癌细胞侵袭转移.
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