【摘 要】
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目的：探讨亚甲基蓝（MB）类似物[2-氯吩噻嗪（2-C）、天青A（A-A）、天青B（A-B）、中性红（NR）]抗谷氨酸（Glu）诱导HT22细胞氧化损伤及其作用机制。方法：采用MTT法检测MB、2-C、A-A、A-B、NR在HT22细胞中的毒性；采用MTT法、LDH法检测各个化合物对Glu诱导HT22细胞氧化损伤模型的保护作用；采用H2DCF-DA染色剂检测各组细胞中ROS水平；采用siRNA干扰
【基金项目】
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浙江省基础公益研究计划项目（LGF18H090015,LGF21H090016）；
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目的：探讨亚甲基蓝（MB）类似物[2-氯吩噻嗪（2-C）、天青A（A-A）、天青B（A-B）、中性红（NR）]抗谷氨酸（Glu）诱导HT22细胞氧化损伤及其作用机制。方法：采用MTT法检测MB、2-C、A-A、A-B、NR在HT22细胞中的毒性；采用MTT法、LDH法检测各个化合物对Glu诱导HT22细胞氧化损伤模型的保护作用；采用H2DCF-DA染色剂检测各组细胞中ROS水平；采用siRNA干扰技术，抑制HT22细胞内MEF2D表达；采用Western blot法检测各个化合物对HT22细胞中肌细胞增强因子2D（MEF2D）、NADH脱氢酶6（ND6）、Akt、GSK-3β蛋白变化情况。结果：根据MTT实验结果计算各个化合物LD50:MB（50.66μmol/L）、2-C（175.90μmol/L）、A-A（152.40μmol/L）、A-B（140.40μmol/L）、NR（73.19μmol/L）。除NR外，其余化合物均对Glu诱导的HT22细胞氧化损伤具有显著的细胞保护作用，随后计算各个化合物EC50值得出：MB（42.13 nmol/L）、2-C（34.32 nmol/L）、A-A（48.96 nmol/L）、A-B（44.42 nmol/L）;ROS染色结果显示：100 nmol/L的MB、2-C、A-B和A-A能显著降低Glu诱导的HT22细胞中ROS水平，而NR对Glu诱导的HT22细胞中ROS水平上升无明显作用；Western blot检测结果证明MB、A-B和A-A明显提高HT22细胞内MEF2D的蛋白水平（P＜0.05）；采用siRNA干扰技术抑制HT22细胞内MEF2D表达后，MTT结果显示抑制MEF2D表达能部分取消化合物MB、2-C、A-B和A-A对Glu诱导HT22细胞损伤的保护作用（P＜0.05）;MB、2-C、A-B和A-A能够激活Akt，增加GSK-3β磷酸化（P＜0.05），使GSK-3β失活，这可能与其激活MEF2D进而提高ND6活性有关。结论：2-C与MB相比具有更低的细胞毒性，且其抗Glu诱导细胞损伤作用效价强于MB；具有吩噻嗪结构的化合物：MB、2-C、A-B和A-A可能通过调节Akt/GSK-3β通路，提高MEF2D/ND6活性，改善线粒体呼吸链功能，进而产生抗Glu诱导的神经细胞氧化损伤作用。
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