【摘 要】
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目的 研究分泌白细胞介素17A (IL-17A)的γδ T细胞对日本血吸虫诱导的早期肝纤维化形成的影响. 方法 将10只6～8周龄C57BL/6野生型雌性小鼠随机分为健康对照组和野生感染组,每
【机 构】
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中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,国家热带病研究中心,世界卫生组织热带病合作中心,科技部国家级热带病国际联合研究中心,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,上海200025
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目的 研究分泌白细胞介素17A (IL-17A)的γδ T细胞对日本血吸虫诱导的早期肝纤维化形成的影响. 方法 将10只6～8周龄C57BL/6野生型雌性小鼠随机分为健康对照组和野生感染组,每组5只.另5只6～8周龄C57BL/6背景的T细胞抗原受体δ链基因敲除(TCR δ KO)小鼠为TCR δ KO感染组.两个感染组每鼠经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(20±2)条,健康对照组不感染.感染后6周,各组小鼠麻醉后脱颈处死,取肝组织研磨后裂解,沉淀部分经密度梯度离心收集肝非实质细胞,采用流式细胞术检测肝非实质细胞中γδ T细胞表达的IL-17A含量,采用ELISA检测裂解上清中IL-17A浓度.另取部分肝组织,4％多聚甲醛固定后,行苏木精-伊红(HE)和Masson染色,观察胶原纤维沉积情况.取各组小鼠外周血,ELISA检测血清中IL-17A浓度.体外培养的人肝星状细胞系(LX-2细胞)分为3组,实验组加入终浓度为10 ng/ml的IL-17A,阳性对照组和阴性对照组分别加入终浓度为10 ng/ml的IL-13和等量PBS,荧光定量PCR检测各组LX-2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col 1)mRNA的相对转录水平. 结果 流式细胞术检测结果显示,野生感染组小鼠表达IL-17A的Vγ2亚型γδ T细胞百分比为(48.0±1.0)％,高于健康对照组的(17.0±1.6)％(P＜0.01).Masson染色结果显示,TCR δ KO感染组小鼠的胶原沉积面积为(3.5±0.2)×104μm2,小于野生感染组的(6.4±0.5)×104 μm2 (P＜0.01).ELISA检测结果显示,TCR δ KO感染组小鼠血清和肝组织裂解液上清中的IL-17A浓度分别为(34.0±22.3)和(101.6±18.6) pg/ml,均低于野生感染组的(143.9±33.8) (P＜0.05)和(217.2±19.2) pg/ml(P＜0.01).荧光定量PCR检测结果显示,经IL-17A刺激后,实验组LX-2细胞中α-SMA和Col 1 mRNA相对转录水平较阴性对照组分别上调(4.0±0.7)和(8.7±1.2)倍(P＜ 0.05或0.01). 结论 分泌IL-17A的γδ T细胞可能参与日本血吸虫感染所致小鼠肝纤维化的进程中,其分泌的IL-17A激活肝星状细胞可能是其加据纤维化的途径.
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