【摘 要】
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目的 本研究旨在探究血浆外泌体源性miR-335-5p调控泛素特异性蛋白酶22（USP22）对三阴性乳腺癌（TNBC）免疫逃逸的影响。方法 收集TNBC患者血浆与健康人血浆，之后分离血浆外泌体，实时定量PCR检测外泌体中miR-335-5p的相对表达。双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与USP22的相互作用。调节外泌体、 MDA-MB-436细胞中miR-335-5p与USP22的表达，将
【机 构】
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山东中医药大学第二附属医院:检验科
【基金项目】
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山东省中医药科学技术研究项目（2017-52）；
论文部分内容阅读
目的 本研究旨在探究血浆外泌体源性miR-335-5p调控泛素特异性蛋白酶22（USP22）对三阴性乳腺癌（TNBC）免疫逃逸的影响。方法 收集TNBC患者血浆与健康人血浆，之后分离血浆外泌体，实时定量PCR检测外泌体中miR-335-5p的相对表达。双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与USP22的相互作用。调节外泌体、 MDA-MB-436细胞中miR-335-5p与USP22的表达，将其与CD8+ T淋巴细胞共培养并将其分为不同组。流式细胞术检测各组细胞中细胞凋亡情况，ELISA检测各组细胞γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平。Western blot法检测细胞中USP22对程序性死亡蛋白1配体1（PD-L1）稳定性的影响。裸鼠成瘤实验检测miR-335-5p与PD-L1在体内对肿瘤生长的影响。结果 TNBC外泌体样本中miR-335-5p的表达下调。USP22被证实为miR-335-5p的一个靶基因，此外，USP22可以抑制PD-L1蛋白泛素化。过表达miR-335-5p能抑制TNBC的免疫逃逸。抑制miR-335-5p可以促进TNBC的免疫逃逸，该作用可以通过下调USP22得到部分挽救。敲低miR-335-5p能促进体内肿瘤生长，加入PD-L1抗体后肿瘤生长被抑制。结论 外泌体源性miR-335-5p通过下调USP22,促进USP22对PD-L1的泛素化，并抑制PD-L1介导的TNBC免疫逃逸。
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