【摘 要】
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目的 探讨人肝细胞株L02脂肪变性时微小RNA-29a(miR-29a)的表达变化及其靶向沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,Sirt1)调
【机 构】
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中国疾病预防控制中心营养与健康所,国家卫生健康委员会微量元素与营养重点实验室,北京 100050
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目的 探讨人肝细胞株L02脂肪变性时微小RNA-29a(miR-29a)的表达变化及其靶向沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,Sirt1)调节脂肪肝细胞脂肪沉积的机制.方法 采用油酸和棕榈酸混合物诱导建立非酒精性脂肪肝细胞模型,验证模型成功后,PCR检测miR-29a和Sirt1的表达变化;生物学预测miR-29a的靶基因;分别转染miR-29a模拟物和抑制剂,过表达miR-29a和抑制miR-29a后再建立人脂肪肝细胞模型.油红O染色观察细胞中脂质蓄积情况并测定甘油三酯含量,荧光定量PCR和免疫印迹法检测Sirt1基因和蛋白表达变化.结果 脂肪肝细胞模型组miR-29a相对表达量和甘油三酯含量显著高于对照组(P＜0.01),Sirt1相对表达量显著低于对照组(P＜0.01);生物学预测Sirt1是miR-29a的靶基因,过表达miR-29a后,细胞内脂滴明显增多,脂肪沉积加重,甘油三酯含量显著增加(P＜0.05),细胞中miR-29a的表达显著上调(P＜0.01),而Sirt1 mRNA表达显著下调(P＜0.05),Sirt1蛋白表达呈下降趋势;与之相反,抑制miR-29a后,细胞中脂滴相对减少,脂肪沉积减轻,甘油三酯含量显著下降(P＜0.05),细胞中miR-29a的表达被有效抑制(P＜0.01),而Sirt1 mRNA的表达显著上调(P＜0.05),Sirt1蛋白表达较对照组呈上升趋势.结论 miR-29a在非酒精性脂肪肝细胞中表达显著上调,miR-29a通过表达上调负调控Sirt1表达从而促进脂肪肝细胞中脂肪沉积.
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