人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43的构建及鉴定

来源 :中华胸心血管外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lanyao88
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目的 构建人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43,为研究连接蛋白Cx43在心肌细胞间通讯、心脏胚胎发育及心肌细胞分化中的作用机制提供物质基础.方法从质粒p18-T上用限制性内切酶BamH1、Xho1切下Cx43 cDNA片断,进行琼脂糖电泳,割胶回收纯化;限制性内切酶BamH1、Xho1酶切质粒pENTR11,将线形化的载体与回收的Cx43 cDNA片断用T4 DNA连接酶连接,测序后通过LR反应克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中.结果凝胶电泳和测序结果均证明已将人类Cx43 cDNA克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中.结论成功构建了人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43。

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