【摘 要】
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目的:构建能在Hep2细胞中表达的颗粒酶B的表达质粒pVAX1-GrB.方法:用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,用RT-PCR方法扩增其分泌蛋白颗粒GrB的全部外显子片
【机 构】
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中山大学中山医学院生物化学教研室,中山大学肿瘤防治中心头颈外科
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目的:构建能在Hep2细胞中表达的颗粒酶B的表达质粒pVAX1-GrB.方法:用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,用RT-PCR方法扩增其分泌蛋白颗粒GrB的全部外显子片段,利用基因重组技术将其定向插入pVAX1多克隆位点.脂质体介导转染Hep2细胞,用间接免疫荧光法观察目的蛋白在细胞中的表达.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得GrB基因片段,GrB准确克隆入pVAX1的多克隆位点,未改变读码框架.转染Hep2细胞后,检测到目的蛋白的表达.结论:成功构建了pVAX1-G
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