人参SRAP-PCR体系优化条件的建立(英文)

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[目的]研究人参基因组SRAP-PCR的扩增条件,建立其优化扩增体系。[方法]采用单因子实验方法探讨模板DNA、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度等因素对PCR结果的影响。[结果]优化后的扩增程序为:94℃预变性2min;94℃变性30s,48℃复性30s,72℃延伸1min,共40次循环;72℃延伸7min。最佳反应体系为:DNA模板30ng,上下游引物浓度2.0μmol/L,dNTP浓度0.3mmol/L,Mg2+2.5mmol/L,总体积25μl。[结论]建立了满足人参SRAP-PCR的优化扩增体系,为人参亲缘关系和遗传多样性SRAP分析提供快速、简便、重复性好的实验方法。 [Objective] The research aimed to study the amplification conditions of SRAP-PCR in ginseng genome and establish its optimized amplification system. [Method] The effects of template DNA, primer concentration, dNTPs concentration and Mg2 + concentration on PCR results were investigated by single factor experiment. [Result] The optimized amplification procedure was as follows: pre-denaturation at 94 ° C for 2 min, denaturation at 94 ° C for 30 s, refolding at 48 ° C for 30 s, extension at 72 ° C for 1 min for 40 cycles, and extension at 72 ° C for 7 min. The best reaction system was: DNA template 30ng, upstream and downstream primer concentration 2.0μmol / L, dNTP concentration 0.3mmol / L, Mg2 + 2.5mmol / L, total volume 25μl. [Conclusion] The optimized amplification system satisfying the SRAP-PCR of ginseng was established, which provided a fast, simple and reproducible experimental method for SRAP analysis of genetic relationship and genetic diversity in ginseng.
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