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研究目的：1．体外建立K562／imatinib耐药细胞株并对其生物学特性初步探讨2．研究其可能的耐药机制，为肿瘤耐药的研究提供实验室条件研究方法：1．K562耐药细胞耐药克隆建立：以伊马替尼(imatinib)浓度梯度递增法诱导K562细胞耐药。极限稀释法克隆筛选，建立耐药细胞株。2．K562R的生物学特性分析：24孔板培养K562R和K562S，绘制细胞生长曲线。MTT法检测不同浓度组的伊马替尼对K562S和K562R耐药性。3．K562R耐药机制的初步分析：PCR技术扩增BCR-ABL融合基因及mdr1多药耐药基因。测序分析ABL酪氨酸激酶区有无点突变。流式细胞术检测P-gp表达。研究结果：1．KS62R的克隆纯化和生物学特性分析：极限稀释法成功克隆筛选出6株K562／imatinib纯化细胞株，其能长期存活于5μmol／L的伊马替尼培养液中。细胞生长曲线显示5μmol／L伊马替尼作用于K562R细胞120h，活细胞数量与0h活细胞数量相比呈指数递增。6个浓度梯度的伊马替尼(0、0．25、0．5、0．75、1．0、2．0μmol／L)作用于K562S细胞24h，发现所有浓度(0浓度除外)伊马替尼均可明显抑制K562S细胞的生长，24h细胞活力几乎为零。MTT法抑制率测定K562S细胞IC50为0．67±0．09μmol／L，K562R细胞约为10．17±0．85μmol／L，耐药倍数约为15倍，细胞耐药性明显增加，各耐药细胞株间IC50无显著性差异。2．K562R耐药机制的初步分析：巢式PCR检测K562R及K562S细胞株均有1579bp及863bp大小BCR-ABL融合基因表达，863bp目的基因序列测定未发现点突变。RT-PCR检测发现一株耐药细胞mdr1表达阳性，流式细胞术检测其P-gp弱阳性，两者具有一致性。初步结论：1．体外成功建立K562／imatinib耐药细胞株6株，平均耐药浓度为10．17±0．85μmol／L，耐药倍数约为15倍，耐药性明显增加。各耐药细胞株间IC50无显著性差异。2．多药耐药基因(mdr1)及其编码蛋白P-pg参与了K562R-6的耐药机制。3．BCR-ABL激酶区序列测定未发现点突变，其耐药机制有待于更进一步的研究。