【摘 要】
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目的:研究Sphk1对胰腺癌SWl990细胞的影响及其在胰腺癌组织中的表达。方法:（1）将培养的胰腺癌SW1990细胞株分为3组:对照组、佛波醇-12-肉豆蔻酸-13酯（PMA）组和二甲基鞘氨醇（DMS）组,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法及Western blot法分别检测鞘氨醇激酶-1 m RNA及蛋白的表达。（2）收集2018年在海南医学院
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目的:研究Sphk1对胰腺癌SWl990细胞的影响及其在胰腺癌组织中的表达。方法:（1）将培养的胰腺癌SW1990细胞株分为3组:对照组、佛波醇-12-肉豆蔻酸-13酯（PMA）组和二甲基鞘氨醇（DMS）组,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法及Western blot法分别检测鞘氨醇激酶-1 m RNA及蛋白的表达。（2）收集2018年在海南医学院第一附属医院肝胆外科行胰腺肿瘤切除术并经病理学诊断为胰腺导管腺癌的癌组织与癌旁组织共15对。采用半定量RT-PCR和Western blot法检测胰腺癌和癌旁组织中鞘氨醇激酶-1的m RNA和蛋白的表达。结果:（1）MTT法检测结果显示PMA组细胞的存活率（OD值:1.37±0.03）较对照组（OD值:1.00±0.01）显著增加,DMS组细胞的存活率（OD值:0.65±0.02）较对照组显著降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）克隆形成实验结果显示PMA组细胞的增殖活力（2.12±0.18）%较对照组（1.39±0.27）%显著增加,DMS组细胞的增殖活力（0.75±0.16）%较对照组显著降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）流式细胞术检测结果显示对照组细胞凋亡率为（16.71±1.53）%、PMA组为（9.70±0.62）%、DMS组为（31.74±1.32）%,经统计学分析显示PMA组细胞凋亡率明显低于对照组（P<0.01）,DMS组细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。说明PMA显著抑制胰腺癌细胞的细胞凋亡,而DMS能促进细胞凋亡。（4）RT-PCR法检测各组鞘氨醇激酶-1 m RNA表达结果显示对照组为0.148±0.006,PMA组为0.202±0.013,DMS组为0.112±0.022,差异均有统计学意义（P<0.05）,说明PMA组鞘氨醇激酶-1 m RNA表达水平较DMS组及对照组明显升高,而DMS组鞘氨醇激酶-1表达水平较对照组明显降低。（5）Western blot法检测各组鞘氨醇激酶-1蛋白表达结果显示对照组为0.182±0.044,PMA组为0.258±0.015,DMS组为0.101±0.034,差异均有统计学意义（P<0.05）,说明PMA组鞘氨醇激酶-1蛋白表达水平较DMS组及对照组明显升高,而DMS组鞘氨醇激酶-1蛋白表达水平较对照组明显降低。（6）胰腺癌组织中鞘氨醇激酶-1的m RNA和蛋白的表达水平均较相邻正常胰腺组织明显增加（P<0.01）。结论:当鞘氨醇激酶-1激活时,胰腺癌细胞的增殖得到显著促进,细胞的凋亡过程受到抑制。反之,当鞘氨醇激酶-1被抑制时,胰腺癌细胞的增殖也受到显著抑制,而细胞的凋亡则受到促进。总的来说可通过调控鞘氨醇激酶-1活性从而对胰腺癌SWl990细胞的增殖和凋亡产生影响,人胰腺癌组织中鞘氨醇激酶-1 m RNA和蛋白的表达水平均较正常胰腺组织明显增加。因此,鞘氨醇激酶-1在胰腺癌的发展中具有重要作用,鞘氨醇激酶-1可能成为胰腺癌治疗中的有吸引力的一个靶点。
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