【摘 要】
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目的:研究大鼠胰头和胰尾端胰岛细胞miRNAs的差异表达及其靶基因预测、信号通路分析,为进一步深入探索miRNAs在胰岛生理及病理的作用研究奠定基础。方法:1.随机选取6至24周正常成年大鼠6只,取胰头端及胰尾端,通过密度梯度离心法分离胰岛,手捡胰岛细胞并镜检确认。2.将胰岛细胞送至上海康成生物公司进行miRNA高通量测序分析,检测miRNAs的表达水平;结合生物信息法筛选出显著差异表达的miRN
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目的:研究大鼠胰头和胰尾端胰岛细胞miRNAs的差异表达及其靶基因预测、信号通路分析,为进一步深入探索miRNAs在胰岛生理及病理的作用研究奠定基础。方法:1.随机选取6至24周正常成年大鼠6只,取胰头端及胰尾端,通过密度梯度离心法分离胰岛,手捡胰岛细胞并镜检确认。2.将胰岛细胞送至上海康成生物公司进行miRNA高通量测序分析,检测miRNAs的表达水平;结合生物信息法筛选出显著差异表达的miRNAs,并通过Targetscan、miRDB数据库对差异表达的miRNAs进行靶基因预测,对两个数据库预测到的靶基因使用VENNY在线数据库取交集后得到共同支持的靶基因,并对靶基因进行GO和KEGG数据库功能分析;通过DAVID数据库对靶基因蛋白进行富集分析,筛选出有统计学差异及临床意义的miRNAs。3.对筛选出的miRNA进行实时荧光定量PCR（q PCR）验证,并通过靶基因及通路分析其对胰头端及胰尾端潜在的生理意义及临床意义。结果:1.通过miRNA测序共检测到445条有统计学意义的miRNAs,以胰尾端为对照组,共筛选出376条非显著差异的miRNAs,69条显著差异表达miRNAs（其中上调的有28条,下调的有41条）。2.GO富集分析结果显示胰头端与胰尾端差异表达miRNAs调控的靶基因富集在定位、分子功能以及生物进程方面均存在差异。由KEGG富集分析可知,胰头端通路富集最高的为FOXO信号通路,其中有26个差异性靶基因富集,由此可知FOXO信号通路可能为胰头端与胰尾端最具有统计学意义的差异性通路。3.根据数据统计及测序分析显示,胰头端及胰尾端的miR-124有着显著性统计学差异,胰头端的miR-124含量显著高于胰尾端。鉴于miR-124富集的通路和靶基因,及其对胰腺各项生理的调控与对胰腺癌的重要意义显示:其通过调控靶基因ATP1A1,ITPR3以及RYR富集于胰岛素分泌信号通路;通过靶基因Flotillin-1,TC10,AMPK,SOS,PP1,PHK,SHC等富集于胰岛素信号通路,以及通过靶基因NF-κB,STAT3,ECAD,ITGB,Rhn GEF,VEGF,ECM,AR,RAl BP1,TRAFs等富集于癌症信号通路;进行实时荧光定量PCR验证结果提示miR-124在胰头端及胰尾端的表达量有统计学差异,与测序结果一致。[结论]1.胰头端及胰尾端除了解剖结构以及生理功能方面的区别外,测序结果显示在miRNAs表达中也存在显著的统计学差异。2.通过GO和KEGG富集分析结果提示,胰头端比胰尾端高表达的靶基因富集通路为FOXO信号通路。3.根据测序结果和q PCR验证提示,胰头端及胰尾端miR-124的表达有统计学差异,胰头端的miR-124表达量明显高于胰尾端。
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