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【目的】 探讨天然产物Dalbinol对人结肠癌HCT-116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 【方法】 体外培养人结肠癌 HCT-116细胞，用不同浓度的 Dalbinol处理后，采用MTT法检测Dalbinol对HCT-116细胞增殖抑制作用的影响；利用Hoechst33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化；采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡的情况；DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧的水平；通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白和凋亡相关蛋白的表达情况。 【结果】 1. Dalbinol对HCT-116细胞增殖的影响：MTT法表明，Dalbinol加药组作用24、48、72 h时，其IC50值分别为(4.8±0.53)、(2.5±0.43)和(0.6±0.22)μM，与对照组相比，Dalbinol可以抑制人结肠癌HCT-116细胞的增殖，且呈剂量和时间效应关系（P<0.05）。 2. Dalbinol对HCT-116细胞凋亡的影响：将Dalbinol按不同终浓度（0.5,1.0,2.0μM）处理HCT-116细胞24 h后，Hoechst33342染色后可观察到细胞皱缩、核破碎、核固缩等典型凋亡的形态学变化。同时Annexin V-FITC/PI双染结果表明，与对照组相比，Dalbinol可浓度依赖性地增加HCT-116细胞凋亡率（P<0.05）。以上结果皆表明Dalbinol可以诱导人结肠癌HCT-116细胞凋亡。 3. Dalbinol对HCT-116细胞中 Wnt/β-catenin信号通路蛋白及凋亡相关蛋白表达的影响：Western blot结果发现，不同终浓度（0.5、1.0和2.0μM）的Dalbinol作用24 h后，HCT-116细胞内总的和胞核β-catenin的表达均下降，尤以胞核β-catenin下降为甚，但胞浆β-catenin水平无明显变化，这结果表明 Dalbinol可以调控Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-catenin的表达。因此，我们推测 Dalbinol可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路来抑制人结肠癌HCT-116细胞的增殖。另外，Wnt/β-catenin通路的下游靶蛋白c-Myc和Survivin表达均降低，这结果也进一步证实我们的推测。为明确Dalbinol调控Wnt/β-catenin通路的具体机制，我们还检测了影响降解复合体生成的相关蛋白 Dvl-2、GSK-3β和GSK-3β(pS9)。Western blot结果发现，Dvl-2和GSK-3β(pS9)的表达明显下降，而总的 GSK-3β蛋白水平无明显变化。上述结果表明，Dalbinol可能通过抑制Dvl-2的表达，使失活型GSK-3β(pS9)的表达下降，从而提高GSK-3β的活性， GSK-3β使β-catenin磷酸化降解增多，最终导致Wnt/β-catenin通路的下游靶蛋白c-Myc和Survivin的表达下降。由此我们得出结论：Dalbinol可能通过下调Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路来抑制人结肠癌HCT-116细胞的增殖。 4. Dalbinol对HCT-116细胞内ROS水平的影响：DCFH-DA检测结果表明， Dalbinol按不同终浓度（0.5,1.0,2.0μM）作用12 h时, HCT-116细胞内ROS水平分别为11.9%、22.1%、37.6%、55.3%，与对照组相比，Dalbinol可使HCT-116细胞内ROS水平升高，并呈浓度依赖性。Western blot结果显示，不同终浓度（0.5、1.0和2.0μM）的Dalbinol处理HCT-116细胞24 h后，cleaved Caspase-3和cleaved PARP蛋白表达增加，总的Caspase-3和PARP蛋白变化趋势不明显。该结果说明 Dalbinol可使 Caspase-3活化并启动凋亡的连锁效应。为阐明Dalbinol诱导HCT-116细胞凋亡的机制，我们进一步研究发现促凋亡蛋白Bax和Bim的表达水平升高，抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平下降，从而导致cleaved Caspase-3和cleaved PARP同时过度活化，但总的Caspase-3和PARP变化趋势不明显。综上，我们得出结论：Dalbinol可能通过促进细胞内ROS产生来诱导人结肠癌HCT-116细胞的凋亡。 【结论】 1. Dalbinol对人结肠癌HCT-116细胞的增殖具有抑制作用，且呈剂量和时间效应关系。 2. Dalbinol可能通过下调 Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路来抑制人结肠癌HCT-116细胞的增殖。 3. Dalbinol可能通过促进细胞内ROS产生来诱导人结肠癌HCT-116细胞的凋亡。